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" 鞘磷脂合酶（Sphingomyelin synthase，SMS)是體內(nèi)從頭合成SM 的最后步驟的關(guān)鍵酶，是動(dòng)脈粥樣硬化病變發(fā)生的關(guān)鍵指標(biāo)之一。SMS2是一潛在的全新藥物靶點(diǎn)，通過(guò)抑制SMS2活性降低SM水平有可能成為治療動(dòng)脈粥樣硬化的新方法。SMS2的抑制還與抗糖尿病和抗代謝綜合征、抗炎、抗腫瘤等有密切關(guān)系。 "

磷脂酶 D 是一種用于磷脂改性的工業(yè)化生產(chǎn)用酶，近年來(lái)研究較多且效果比較明顯的是通過(guò)微生物發(fā)酵的方法獲得磷脂酶 D。磷脂酶 D 主要用于兩個(gè)方面：一是從卵磷脂出發(fā)，通過(guò)磷酸基轉(zhuǎn)移反應(yīng)，制備含量較少的磷脂化合物，如磷脂酰絲氨酸（PS）、磷脂酰肌醇（PI）等；二是通過(guò)轉(zhuǎn)移反應(yīng)合成新的磷脂衍生物，用在藥物學(xué)領(lǐng)域。磷脂酰絲氨酸是磷脂中的一種，天然含量稀少，但它是大腦中主要的酸性磷脂，能控制和調(diào)節(jié)細(xì)胞膜關(guān)鍵蛋白的功能狀態(tài)，提高腦細(xì)胞的活力，改善大腦功能、修復(fù)大腦損傷，成為“腦專(zhuān)一性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)”。本項(xiàng)目通過(guò)菌種篩選獲得一株高產(chǎn)磷脂酶 D 的肉桂鏈霉菌菌株。通過(guò)發(fā)酵優(yōu)化，發(fā)酵酶活可達(dá)到 10U/mL 以上，可用于 PS、PI 的生產(chǎn)。 

α-淀粉酶抑制劑是一種純天然生物活性物質(zhì)，屬于糖水解酶抑制劑的一種。 α-淀粉酶抑制劑通過(guò)對(duì)淀粉酶的抑制作用而發(fā)揮減肥效應(yīng)，并經(jīng)胃腸道排出體外，因此不必進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)，不作用于大腦中樞，減肥的同時(shí)不抑制食欲，使用劑量很高時(shí)也無(wú)副作用，符合世界衛(wèi)生組織的減肥原則。對(duì)于肥胖患者，可減少糖向脂肪轉(zhuǎn)化，延緩腸道的排空，增加脂肪消耗以減少體重。因此，能用α-淀粉酶抑制劑來(lái)防止和治療肥胖癥、脂肪過(guò)多癥、動(dòng)脈硬化癥、高血脂及糖尿病等。另外，純化的α-淀粉酶抑制肽的另一重要作用是作為糖尿病的輔助治療（中藥一類(lèi)），可以阻礙或延緩其對(duì)食物中主要的碳水化合物淀粉的消化作用，阻止血糖的升高，從而能使糖尿病人吃飽飯，消除饑餓感。本成果利用固液萃取技術(shù)、膜技術(shù)、雙水相萃取技術(shù)和層析技術(shù)等現(xiàn)代生物分離技術(shù)從小麥中分離純化了 -淀粉酶抑制劑（ -淀粉酶抑制劑的活性大于2500U/mg.protein），達(dá)到了日本國(guó)應(yīng)用的要求。新工藝較原工藝相比具有操作方便，收率高，成本低，產(chǎn)品質(zhì)量好，易于工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。據(jù)悉，歐美已將 -淀粉酶抑制劑開(kāi)發(fā)成保健食品,如starch blocker。每年的用量在100噸以上，且近年來(lái)每年以30％的速度在遞增。預(yù)計(jì)到2010年我國(guó)將有2億人口加入肥胖者行列，而糖尿病早已成為我國(guó)中老年人的常見(jiàn)病、多發(fā)病，因此將本成果應(yīng)用于治療上述疾病方面是極有市場(chǎng)潛力的。

本發(fā)明涉及幾丁質(zhì)合酶，特別涉及卵菌門(mén)中的幾丁質(zhì)合酶，其氨基酸序列為與如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列在相似性在75％以上，優(yōu)選在80％以上，更優(yōu)選在90％以上，最優(yōu)選在95％以上且具有與如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列相同功能的氨基酸序列。所述幾丁質(zhì)合酶的活性水平能夠調(diào)節(jié)卵菌的活性孢子囊和活性游動(dòng)孢子的產(chǎn)量從而影響卵菌的致病力或寄主的發(fā)病程度。

"磷脂酶 D （PLD）是一類(lèi)具有水解作用和磷?；D(zhuǎn)移作用的酶, 在磷脂改性方面發(fā)揮著重要作用。它可以將大量磷脂酰膽堿(PC) 催化合成為自然界稀有的磷脂質(zhì)，如磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰絲氨酸(PS)和磷脂酰甘油(PG)等，合成的磷脂質(zhì)在醫(yī)藥和食品工業(yè)具有很大的應(yīng)用前景。但由于來(lái)源不足和價(jià)格高，PLD的工業(yè)應(yīng)用一直受到限制。本項(xiàng)目通過(guò)基因工程和微生物發(fā)酵技術(shù)，解決了PLD工業(yè)化應(yīng)用中難表達(dá)和表達(dá)量不足的難題，利用重組大腸桿菌發(fā)酵實(shí)現(xiàn)了PLD的高水平表達(dá)，其酶活為106 U?L-1，產(chǎn)量為748 mg?L-1，分別比目前報(bào)道的最高水平提高了100倍和20倍；同時(shí)，本項(xiàng)目還建立了一種簡(jiǎn)單有效提取重組PLD的方法，可望大大降低PLD的生產(chǎn)成本。本技術(shù)先進(jìn)，應(yīng)用前景看好，如按106 U?L-1的發(fā)酵水平生產(chǎn)，成本約100元人民幣/1000 U，目前市場(chǎng)售價(jià)在3000-6000元/1000 U，利潤(rùn)空間很大。 "

磷脂酶D（PLD, EC 3.1.4.4）是一類(lèi)廣泛存在于各種生物體的酶，具有水解作用和磷?；D(zhuǎn)移作用（見(jiàn)圖1）。作為一種酶制劑，PLD的轉(zhuǎn)磷脂?；钚杂葹橹匾?，被用于制備具有生物活性的稀有磷脂。其中，以大豆磷脂酰膽堿（PC）為底物，PLD酶法制備磷脂酰絲氨酸（PS），受到廣泛關(guān)注。PS作為腦健康營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，相繼被美國(guó)FDA、日本HBM和中國(guó)國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委所認(rèn)證，列為新資源食品。相較于提取自牛腦和植物的PS，生物酶法制備的PS，避免了食品安全和植物源含量低的問(wèn)題。進(jìn)一步，一些新的結(jié)構(gòu)和功能磷脂，通過(guò)P

本發(fā)明涉及辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)中的幾丁質(zhì)合酶。其氨基酸序列為與如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列在相似性在90％以上，優(yōu)選在95％以上，更優(yōu)選在98％以上且具有與如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列相同功能的氨基酸序列。所述辣椒疫霉病菌的幾丁質(zhì)合酶的活性水平能夠調(diào)節(jié)活性孢子囊和活性游動(dòng)孢子的產(chǎn)量從而影響辣椒疫霉病菌的致病力或寄主的發(fā)病程度。

本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種豇豆胰蛋白酶抑制劑基因、及其應(yīng)用、大量制備豇豆胰蛋白酶抑制劑的方法。如上所述本發(fā)明的發(fā)明人首先利用pcr反應(yīng)從豇豆基因組dna中直接獲得cpti基因(cpti基因不含有內(nèi)含子)，然后優(yōu)化改造所述cpti序列，改造后的序列在大腸桿菌中的表達(dá)量和表達(dá)比活性都有顯著改進(jìn)。

項(xiàng)目成果/簡(jiǎn)介:本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種豇豆胰蛋白酶抑制劑基因、及其應(yīng)用、大量制備豇豆胰蛋白酶抑制劑的方法。如上所述本發(fā)明的發(fā)明人首先利用pcr反應(yīng)從豇豆基因組dna中直接獲得cpti基因(cpti基因不含有內(nèi)含子)，然后優(yōu)化改造所述cpti序列，改造后的序列在大腸桿菌中的表達(dá)量和表達(dá)比活性都有顯著改進(jìn)。

傳統(tǒng)的抗腫瘤藥物，如烷化劑、鉑類(lèi)試劑、作用于核酸合成的藥物、作用于微管蛋白合成 的藥物等，一般存在毒性較大、選擇性較低等問(wèn)題，因此，研究尋找安全有效、選擇性較好的 靶向性抗腫瘤藥物具有重大的科學(xué)意義和巨大的社會(huì)價(jià)值。 組蛋白去乙?；?(Histone Deacetylase，HDAC) 是治療腫瘤的新靶標(biāo)，其抑制劑 Vorinostat (SAHA) 和Romidepsin (FK228) 已分別于2006年和2009年經(jīng)美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市用于治 療表皮T細(xì)胞淋巴瘤；該類(lèi)抑制劑顯示出良好的腫瘤治療效果及較小的毒副作用，是目前最具 前景的抗腫瘤藥物之一。 本項(xiàng)目綜合運(yùn)用分子動(dòng)力學(xué)模擬、計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)、化學(xué)合成、藥理學(xué)活性測(cè)試等 方法，通過(guò)“設(shè)計(jì)－合成/修飾－測(cè)試”的多次循環(huán)，開(kāi)發(fā)了一系列結(jié)構(gòu)新穎的四氫-γ-咔啉骨 架的HDAC抑制劑。該類(lèi)抑制劑可以有效抑制HDAC總酶及HDAC1的活性，多個(gè)化合物的酶 活性都低于50 nM；并且，該系列多數(shù)化合物對(duì)Hela、A549、HCT116、K562、MCF-7等腫瘤細(xì) 胞株表現(xiàn)出比陽(yáng)性對(duì)照藥物SAHA更高的活性，多個(gè)化合物對(duì)所測(cè)腫瘤細(xì)胞株的抑制活性低于 1 μM，而對(duì)于人類(lèi)正常細(xì)胞無(wú)抑制活性；在動(dòng)物模型試驗(yàn)中，代表性化合物對(duì)接種Lewis肺癌 荷瘤小鼠模型表現(xiàn)出良好的治療效果，且沒(méi)有觀(guān)察到明顯的體重變化和毒性反應(yīng)。因此，該類(lèi) HDAC抑制劑可以作為藥物先導(dǎo)化合物用于制備抗腫瘤藥物，為廣大腫瘤病患者帶來(lái)福音，也 向開(kāi)發(fā)我國(guó)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的抗腫瘤藥物邁進(jìn)一步。