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其他成果/n一種從柚子皮中提取醇溶糖的方法，包括如下步驟：1)以干燥、粉碎的柚子皮為原料，以乙醇水溶液為溶劑，在室溫下進(jìn)行浸提，過濾后得濾餅和浸提液；2)浸提液經(jīng)減壓旋轉(zhuǎn)濃縮得濃縮液；3)上大孔樹脂柱，將黃酮、色素類物質(zhì)吸附分離，用蒸餾水沖洗大孔樹脂柱，收集柱后有效餾分液；4)將柱后有效餾分液再次進(jìn)行減壓旋轉(zhuǎn)濃縮得初級醇溶糖產(chǎn)品，經(jīng)在?60℃～?105℃溫度條件下放置24h～72h和室溫真空干燥，得醇溶糖產(chǎn)品。本發(fā)明采用乙醇水溶劑進(jìn)行浸提，可避免蛋白質(zhì)等極性物的浸出；浸提液經(jīng)濃縮后，進(jìn)行大劑量上柱，可以去除黃酮和色素等物質(zhì)，得到產(chǎn)率較大、純度較高的醇溶糖；具有單批次處理量大，提取成本低的特點。

癌癥已成為公眾健康的重大殺手，每年因癌癥死亡的人數(shù)接近1000萬，傳統(tǒng)的放療、化療由于過高的毒副作用，外科手術(shù)部位有限而難以有效治療，靶向藥物的發(fā)展極大推動了腫瘤治療，然而也存在易產(chǎn)生耐藥性等問題。免疫療法作為新興的腫瘤治療策略，具有精準(zhǔn)打擊、低毒副作用、不易產(chǎn)生耐藥等優(yōu)點逐步受到關(guān)注，其中溶瘤病毒能夠選擇性在腫瘤細(xì)胞中復(fù)制而不破壞正常細(xì)胞，因而具有很大的應(yīng)用前景（詳細(xì)內(nèi)容見前期推送科普系列——溶瘤病毒腫瘤治療）。目前許多溶瘤病毒以實體瘤為治療靶標(biāo)，而應(yīng)用于血液腫瘤的成功案例卻很少。近日，吉林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院于湘暉課題組在國內(nèi)主辦的SCI雜志Signal Transduction and Targeted Therapy上在線發(fā)文，題為“Enhancing the antitumor activity of an engineered TRAIL-coated oncolytic adenovirus for treating acute myeloid leukemia”，該研究構(gòu)建了表達(dá)TRAIL融合蛋白的溶瘤腺病毒，與人參皂苷Rh2聯(lián)用，實現(xiàn)選擇性殺傷血液腫瘤，為白血病的治療提供了新思路。急性髓系白血病（AML）是髓系造血干細(xì)胞或祖細(xì)胞的惡性病變，原始細(xì)胞異常增生、分化。盡管一線治療、鞏固化療的方案能夠完全緩解許多患者病癥，但是仍有部分患者無明顯療效，還有一些患者存在復(fù)發(fā)情況，亟需新的治療方式。之前的研究中，研究者曾構(gòu)建了表面展示腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TRAIL）的腺病毒，能夠結(jié)合腫瘤表面死亡受體DR4和DR5，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，減弱病毒肝臟趨向性。為了更好評估病毒載體的感染與復(fù)制造成的影響，研究者通過流式細(xì)胞儀分析了病灶內(nèi)分離的AML細(xì)胞上的TRAIL受體（死亡受體DR4/5、誘餌受體DcR1/2）和腺病毒受體（CAR、整合素 αvβ3 和整合素αvβ5），發(fā)現(xiàn)多數(shù)表達(dá)中等水平TRAIL受體，培養(yǎng)細(xì)胞系也有類似現(xiàn)象，而正常粒細(xì)胞、T細(xì)胞這兩類受體表達(dá)很低，因此選擇TRAIL表面展示腺病毒能夠較好進(jìn)行靶向治療。研究者為構(gòu)建溶瘤腺病毒，通過將腺病毒A3衣殼蛋白IX插入“拉鏈結(jié)構(gòu)”，使得TRAIL能夠與“拉鏈結(jié)構(gòu)”偶聯(lián)展示在衣殼蛋白表面。由于只有約17%的衣殼蛋白連接上了TRAIL，研究者試圖采用新的策略：在大腸桿菌中表達(dá)可溶性TRAIL-“拉鏈結(jié)構(gòu)”融合蛋白，再將可溶性的蛋白與病毒粒子孵育，離心后分離表面覆蓋可溶性TRAIL的腺病毒粒子。通過變性凝膠電泳、高效液相色譜、斑點雜交等證實了改造的腺病毒zA4載有活性更高的TRAIL。細(xì)胞實驗也證明zA4相較于原來的版本A3、A4侵染能力、特異性顯著提高。細(xì)胞結(jié)合試驗用于評估侵染活性，證明了攜帶TRAIL顯著促進(jìn)了腺病毒的內(nèi)吞；定量PCR試驗用于評估病毒復(fù)制能力，zA4在癌細(xì)胞中復(fù)制顯著強于其他載體。為有效評估zA4載體抗白血病活性，在不同感染復(fù)數(shù)下以不同載體侵染培養(yǎng)AML細(xì)胞系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)zA4顯著誘導(dǎo)培養(yǎng)細(xì)胞的凋亡。對臨床分離原代AML細(xì)胞深入探究，zA4顯著抑制了大部分AML細(xì)胞的增殖，然而值得注意的是，少部分不表達(dá)死亡受體的細(xì)胞無明顯變化。溶瘤病毒能否在體內(nèi)發(fā)揮作用直接決定了其是否具有臨床價值，基于之前的細(xì)胞實驗，研究者對皮下移植造模小鼠注射了腺病毒載體，發(fā)光成像和病毒基因組分析均證實了載體腫瘤組織靶向性。zA4處理小鼠顯著抑制腫瘤生長，正常器官組織形態(tài)學(xué)、生化特征均未變化，因此未產(chǎn)生肝損傷。同時還觀察到凋亡重要因子caspase-3水平顯著上調(diào)。在更加真實的小鼠白血病模型中，也觀察到相似的結(jié)果，病毒在腫瘤消失后也并不會長時間存在。然而總有一些原代AML細(xì)胞TRAIL表達(dá)量很低，影響zA4的效果。聯(lián)系之前的研究，人參皂苷Rh2能夠誘導(dǎo)白血病細(xì)胞死亡受體表達(dá)和細(xì)胞毒性，研究者就試圖通過Rh2增強TRAIL誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡。通過IC50測定、信號通路分析證實了存在協(xié)同效應(yīng)，在細(xì)胞、小鼠水平上都得到了證實，兩者聯(lián)合使用促進(jìn)白血病腫瘤的凋亡。該研究通過優(yōu)化載體結(jié)構(gòu)、聯(lián)合用藥等方式增強了溶瘤腺病毒的活性，拓寬了溶瘤病毒的潛在適應(yīng)癥范圍，后續(xù)深入的分子機制探究以及療效的評估將有助于為白血病治療開辟新的道路。

本研究利用人工合成的免疫抗原，經(jīng)動物免疫后獲得特異性好的多克隆抗體，建立了 MC-LR 高靈敏間接競爭 ELISA 檢測方法，經(jīng)和國外進(jìn)口的同類產(chǎn)品比較，在很多關(guān)鍵指標(biāo)上已經(jīng)達(dá)到或超過進(jìn)口產(chǎn)品。該藻毒素快速檢測技術(shù)和檢測產(chǎn)品，靈敏度較高，特異性好，制備簡單，成本低廉，適合規(guī)模化試劑盒的生產(chǎn)。 創(chuàng)新要點 （1）性能指標(biāo)達(dá)到國際先進(jìn)水平。經(jīng)第三方專業(yè)權(quán)威機構(gòu)或部門的驗證（附件 11），最低能檢測出 0.05ng/ml 的 MC-LR 含量，本項目產(chǎn)品技術(shù)含量高，操作簡便快捷，結(jié)果靈敏準(zhǔn)確，檢測成本低廉

本發(fā)明涉及一種新的免疫毒素，其特征在于利用人源性毒素穿孔素（Perforin）的活性片斷作為毒素分子，通過基因工程技術(shù)將毒素分子與載體分子的基因重組在大腸桿菌中表達(dá)出的免疫毒素，其優(yōu)點是對人體不具有免疫原性，有嚴(yán)格靶向性，可直接激發(fā)細(xì)胞損傷過程，殺滅靶細(xì)胞，不需要內(nèi)化及細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運過程，可用于治療某些腫瘤和自身免疫性疾病。特別是適合于抑制器官移植時的免疫排斥

研發(fā)階段/n內(nèi)容簡介：應(yīng)用現(xiàn)代酶化工高新技術(shù)，將魔芋精粉中的葡甘聚糖深度開發(fā)成一種新型生物殺菌劑（類毒素）。本產(chǎn)品獲得一項專利，專利號：ZL0015970.4。該產(chǎn)品為魔芋葡甘聚糖（其分子量為2000以下）的改良產(chǎn)物，屬弱堿性水溶性抗菌劑，是一種廣譜性抗真菌病毒的半合成生物農(nóng)藥，可造成病原菌細(xì)胞畸變，產(chǎn)生大量泡狀物，細(xì)胞壁斷裂，菌體崩潰。對病原菌孢子萌發(fā)有很強的抑制作用，還有交叉保護(hù)和誘導(dǎo)抗性的功能。同時具有增強免疫的藥效特征，國內(nèi)外尚無這方面的報道。藥效試驗證實，類毒素對各種類型的果蔬病害，特別是

研發(fā)階段/n真菌毒素是由產(chǎn)毒真菌產(chǎn)生的有毒次生代謝產(chǎn)物，是常見的致癌物質(zhì)。污染食品后，容易出現(xiàn)急性和慢性毒性。為此，世界上幾乎所有的國家和地區(qū)都規(guī)定了黃曲霉毒素等真菌毒素在食品及飼料中的最大允許含量并作為強制性標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。目前，真菌毒素的檢測方法都需要使用昂貴、劇毒的真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品。多檢測人員對經(jīng)常接觸劇毒的真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品有很強的心理戒備，而昂貴的標(biāo)準(zhǔn)品也致使真菌毒素的檢測費用偏高。技術(shù)水平：真菌毒素的快速檢測技術(shù)以抗獨特型抗體（一種蛋白質(zhì)）作為真菌毒素的代用品，從而使檢測過程中無需使用真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品

所屬領(lǐng)域：生物技術(shù)與醫(yī)藥成果介紹：自主開發(fā)溶析-鹽析復(fù)合結(jié)晶技術(shù)，尤其適用于熱敏性、生物活性、多羥基類物質(zhì)的結(jié)晶專利情況：申請成熟度：量產(chǎn)創(chuàng)新要點：結(jié)晶過程無需外加熱量，節(jié)能降耗減排，操作條件溫和，可有效保護(hù)生物活性

農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中許多病害發(fā)生、發(fā)展嚴(yán)重，目前在生產(chǎn)中仍以化學(xué)防治為主，由于田間化學(xué)用藥次數(shù)的提高，病菌已產(chǎn)生明顯的抗藥性。如番茄灰霉病是由灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)侵染引起的，是番茄生產(chǎn)中的主要病害，嚴(yán)重影響番茄的產(chǎn)量及品質(zhì)。由于缺乏抗灰霉病的抗原材料，通過常規(guī)方法很難育成番茄灰霉病的抗性品種。傳統(tǒng)的化學(xué)防治不僅高殘留、高污染，且對葉圍有益微生物區(qū)系造成破壞，自然抗病能力進(jìn)一步減弱。隨著人們生活水平的提高，對番茄等果蔬產(chǎn)品的品質(zhì)要求越來越高，綠色和有機食品逐漸成為消費市場的主流，市場潛力巨大。在食品安全、環(huán)境保護(hù)、農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的時代潮流下，研發(fā)新型生物農(nóng)藥逐步取代化學(xué)農(nóng)藥已成為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的重要目標(biāo)，也是經(jīng)濟和社會發(fā)展的必然趨勢。 利用生防微生物及其次生代謝產(chǎn)物是生物防治的重要手段，我國和世界上許多國家已有商品化微生物農(nóng)藥產(chǎn)品。目前對于番茄灰霉病的微生物防治研究多數(shù)處于實驗室和溫室階段，田間應(yīng)用的極少，多數(shù)菌劑在田間應(yīng)用過程中防效不穩(wěn)，這是制約微生物菌劑開發(fā)應(yīng)用的一個瓶頸。此外，多數(shù)研究只是針對某一種病害，具有廣譜抗性的菌株很少。本實驗室在土壤中分離出一株新的粉紅粘帚菌（WY-1），初步研究表明，該菌對番茄灰霉病、葉霉病、枯萎病、黃萎病和綿疫病等病原菌均有抑制作用（已獲專利，專利號ZL2009 1 0072862.4）該菌株是可通過多種機制共同作用抑制數(shù)種植物病原菌的生防菌，能有效的防治番茄、辣椒等多種作物的灰霉病、葉霉病、枯萎病、黃萎病和綿疫病等，同時具有較好的促生作用，具有一菌多效的特點。其作用機制包括競爭、重寄生、溶菌、拮抗和誘導(dǎo)抗性等。由于該生物制劑是一種廣譜抗性的生防菌劑，對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)具有重要的社會意義。這種以防治番茄灰霉病為主的廣譜性生防菌劑，可以有效的控制保護(hù)地生產(chǎn)病害的發(fā)生，在滿足菜籃子需求的基礎(chǔ)上，更保證了有機蔬菜的安全生產(chǎn)。

已有樣品/n目前國內(nèi)市場所使用的霍亂毒素及標(biāo)記物產(chǎn)品，基本來自進(jìn)口商業(yè)渠道，價格昂貴，純度有限。中科院武漢物數(shù)所通過有毒蛋白的高效表達(dá)技術(shù)及蛋白復(fù)性組裝機制，大批量生產(chǎn)具有生物活性的霍亂毒素，純度高，可改造成衍生物，滿足國內(nèi)生物醫(yī)藥研究需求。產(chǎn)品優(yōu)勢如下：1、操作簡單，普通生化實驗室易執(zhí)行2、產(chǎn)品純度高，產(chǎn)量大，相應(yīng)的成本低3、可進(jìn)行神經(jīng)環(huán)路示蹤標(biāo)記用于神經(jīng)解剖學(xué)研究，也可以改造發(fā)展出多種衍生物，用于滿足國內(nèi)科研和市場需求。市場預(yù)期：目前市場上購買的霍亂毒素及衍生物，基本來自SIGMA公司，平均價格