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硒是維持人和動物生命話動和正常生理功能所必需的微量元素之一，具有抗 癌，保護心肌等復雜的生理功能。缺硒時，機體免疫功能降低，易發(fā)生各種缺硒疾病.已知有40余種疾病與缺硒有關(guān)，常見的如克山病、大骨節(jié)病、高血壓、缺血性心臟病、肝硬化、胰腺炎、纖維瘤、癌癥、肌瘤、糖尿病、白內(nèi)障等。由于抗腫瘤效果顯著，被譽為“抗癌之王”。我國72%面積是缺硒地區(qū)，人體普遍缺硒。目前醫(yī)療用的硒補充劑是亞硒酸鹽。但亞硒酸鹽不能通過飲食補硒，因為過量攝入會中毒。 硒在人體和酵母細胞內(nèi)的存在方式是有機硒，不會導致中毒。本項目提供硒酵母的生產(chǎn)和相關(guān)硒酵母食品的制造技術(shù)。

研發(fā)階段/n本發(fā)明公開了一種醬油釀造專用酵母營養(yǎng)鹽及其應用，該營養(yǎng)鹽由酵母浸出物、無機鹽和維生素組成，能提供醬油酵母在生長代謝過程中所需的營養(yǎng)物質(zhì)，顯著提高醬油酵母的高耐性，使其在高鹽和高溫環(huán)境下能保持旺盛的生理活性，能使耐鹽魯氏酵母的耐鹽度提高到16%以上，耐溫度從45℃提高到50℃，球擬酵母的耐鹽度提高到20%以上，耐溫度從35℃提高到45℃。

中試階段/n采用形態(tài)及分子生物學相結(jié)合的方法對酒曲等樣品中分離得到的典型根霉菌株進行分離鑒定，獲得4 株(R1-R4)米根霉(Rhizopus oryzae),3株(R5-R7)小孢根（R.microsporus）。PCR 結(jié)果分析表明，上述菌株均不含合成根霉的關(guān)鍵基因(rhiE)。并以R5 和R7 為菌種制作酒曲，優(yōu)化了麻城木子店傳統(tǒng)老米酒生產(chǎn)工藝參數(shù)，并對米酒的品質(zhì)進行了分析。結(jié)果表明，以R5 和R7 為菌種生產(chǎn)的米酒符合國家（清爽型黃酒）標準，在游離氨基酸含量方面優(yōu)于傳統(tǒng)釀造米酒。

該項目 成功 構(gòu)建 了 一株高 產(chǎn)堿 性果 膠 酶的畢 赤酵 母工 程 菌 (Pichia pastoris GS115),通過對發(fā)酵過程的優(yōu)化控制，在 3L 罐中酶活達到 890U/mL。 在此基礎上進行了堿性果膠酶的中試及其工業(yè)化研究，在 10 噸發(fā)酵罐中產(chǎn)酶達到 1305U/mL.采用該重組堿性果膠酶代替?zhèn)鹘y(tǒng)的強堿高溫工藝，廢水 COD 顯著降低，可生化性較大提高。處理體系 pH 值為 9.4，代于堿精練水平；酶處理溫度低于堿處理，這些結(jié)果對棉織物前處理的清潔生產(chǎn)具有重要的應用價值。 

本發(fā)明達到的技術(shù)效果為工程化釀酒酵母菌可實現(xiàn)無需添加異源前體物或底物僅通過培養(yǎng)微生物即可從頭合成高效人參皂苷Ro、竹節(jié)參皂苷Ⅳa、姜狀三七苷R1等三種齊墩果烷型稀有人參皂苷以及金盞花苷E。 一、項目分類 關(guān)鍵核心技術(shù)突破 二、技術(shù)分析 人參皂苷Ro 是人參的主要活性成分之一，具有多種藥理、生理活性,在人參中含量較低（約0.4%），無法滿足日益增長的市場需求，而利用微生物從頭合成人參皂苷Ro則可以有效解決該問題，顛覆傳統(tǒng)的獲取方式，然而合成途徑未知，目前尚未有利用微生物從頭合成的報道。 本發(fā)明技術(shù)方案：1.通過生物信息學分析，對現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫中的多種植物基因組、轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進行分析和比對，初步篩選候選基因，再結(jié)合前期經(jīng)驗和實驗基礎通過進化樹分析、同源建模、分子對接、保守序列分析等手段，確定最終的候選基因；2.通過酶工程等手段，對候選基因進行重組表達、體外酶活驗證、底物譜驗證等，挑選最合適的酶；3.通過合成生物學、代謝工程、分子生物學相關(guān)技術(shù)手段，對相關(guān)酶進行質(zhì)粒構(gòu)建、底盤宿主代謝網(wǎng)絡調(diào)控、異源途徑整合，最終成功構(gòu)建人參皂苷Ro微生物細胞工廠。 本發(fā)明解決了人參皂苷Ro天然代謝途徑未知、異源途徑與底盤宿主適配性、已報道相關(guān)酶活性低等關(guān)鍵技術(shù)問題。本發(fā)明達到的技術(shù)效果為工程化釀酒酵母菌可實現(xiàn)無需添加異源前體物或底物僅通過培養(yǎng)微生物即可從頭合成高效人參皂苷Ro、竹節(jié)參皂苷Ⅳa、姜狀三七苷R1等三種齊墩果烷型稀有人參皂苷以及金盞花苷E。 本發(fā)明創(chuàng)新點包括：1.通過基因挖掘手段獲得的關(guān)鍵酶性能遠遠優(yōu)于已報道的酶；2.通過基因挖掘手段獲得的多個關(guān)鍵酶，實現(xiàn)了人參皂苷Ro的合成途徑構(gòu)建；3.首次實現(xiàn)了利用微生物從頭合成人參皂苷Ro、竹節(jié)參皂苷Ⅳa、姜狀三七苷R1等三種齊墩果烷型稀有人參皂苷以及金盞花苷E。 齊墩果烷型稀有人參皂苷，由于其豐富且具備一定特殊性的藥理、生理活性，可作為現(xiàn)有人參皂苷市場的強力補充，應用前景廣闊。而其天然含量極低，利用微生物對其進行從頭合成可大大降低生產(chǎn)成本與產(chǎn)物分離純化難度，減少有機試劑用量，不依賴植物種植，周期更短，符合國家綠了環(huán)保、可持續(xù)發(fā)展的硬性要求，微生物綠色制造是當前的政策導向也是發(fā)展的必然趨勢。

本發(fā)明公開了一種冠突散囊菌株及其應用，冠突散囊菌株(Eurotium cristatum)于2016年的10月13日保藏于北京的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNo.13173；冠突散囊菌株是從茯磚茶中分離出的；冠突散囊菌株用于制備冠突散囊菌株微生物制劑。本發(fā)明的冠突散囊菌株微生物制劑具有抗氧化作用(具有清除DPPH自由基的作用、清楚超氧陰離子作用、具有還原作用)，抑菌作用(抑制大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、腸沙門氏菌)，以及抑制乙酰膽堿酯酶活性作用。

本發(fā)明公開了一株棘孢木霉菌株及其應用，該棘孢木霉菌株命名為棘孢木霉(Trichoderma?asperellum)Thz01，保藏號為CGMCC?No.6422。本發(fā)明的棘孢木霉菌株是從辣椒生境中分離出來的，對辣椒疫霉菌具有顯著的拮抗作用，明顯重寄生于辣椒疫霉菌，能有效降解辣椒疫霉菌的菌絲體；用該菌株制備得到的生防制劑，可有效防治辣椒疫病。

葡萄糖二酸是一種重要的化合物，在醫(yī)療和工業(yè)中有著廣泛的應用。目前生產(chǎn)葡萄糖二酸的方法主要以化學法-葡萄糖化學氧化法為主，但該方法具有選擇性低、成本高、得率低、要高溫及產(chǎn)生大量氧化反應副產(chǎn)物不利于后續(xù)葡萄糖二酸的分離等局限性。目前生物法合成葡萄糖二酸主要是在大腸桿菌中進行的，但在大腸桿菌中異源合成葡萄糖二酸被許多因素限制。釀酒酵母因具有耐酸能力強、耐低溫、可低 pH 發(fā)酵、沒有噬菌體感染、適合大規(guī)模發(fā)酵、易分離和高抗逆性等特點，已被廣泛用于產(chǎn)有機酸的研究，因此釀酒酵母比大腸桿菌更適合葡萄糖二酸的生產(chǎn)并具有更高的工業(yè)應用價值。利用釀酒酵母合成葡糖二酸具有很好的應用前景。 創(chuàng)新要點 1) 以釀酒酵母 BY4741 為出發(fā)菌株，將擬南芥的肌醇加氧酶 MIOX4 和丁香假單胞菌的 UDH 基因在 delta 重復序位點高效表達，敲除轉(zhuǎn)錄抑制因子OPI1 獲得工程菌 Bga-3，該菌株在分批補料發(fā)酵條件下能夠產(chǎn) 6 g/L 的葡萄糖二酸，為目前報道的最高值； 2) 通過提高工程菌的轉(zhuǎn)運胞外肌醇的能力和工程菌自身合成肌醇的能力，解決提高葡萄糖二酸產(chǎn)量的關(guān)鍵問題； 3) 進一步協(xié)調(diào)肌醇用于細胞自身代謝活動和葡萄糖二酸合成之間的分配關(guān)系，并通過提高葡萄糖二酸合成途徑效率和發(fā)酵優(yōu)化，提高肌醇利用率和葡萄糖二酸合成的產(chǎn)量。 

機體內(nèi)無機元素的代謝紊亂是糖尿病發(fā)病原因之一，因為胰島素抵抗而形成大量的Ⅱ型糖尿病。研究證明，鉻和釩元素可以提高靶組織對胰島素的敏感性因此補鉻補釩是提高胰島素利用率，降低胰島素抵抗的有效途徑之一，同時可以緩解由于胰島素抵抗而引起的眾多糖尿病并發(fā)癥。以酵母菌為載體提供的有機鉻和有機釩，有利于人和動物體的吸收利用，減少應激性，而且在加工和儲存中更為穩(wěn)定。因此是安全高效的鉻釩元素補充形式。本項目提供鉻釩酵母的生產(chǎn)和鉻釩酵母相關(guān)食品飲料的制造技術(shù)。

可以量產(chǎn)/n針對當前工業(yè)發(fā)展對脂肪酶的大量需求與脂肪酶實際表達水平較低的技術(shù)瓶頸，突破了脂肪酶超高效表達技術(shù)關(guān)鍵，建立了真菌脂肪酶高效表達技術(shù)平臺，構(gòu)建的解酯耶氏酵母脂肪酶Lip2基因工程菌10L發(fā)酵，酶活力可達6,5000 U/ml以上，比國際報道的最高值提高4倍以上，具有極強的國際競爭力。產(chǎn)品可用于油脂水解、轉(zhuǎn)酯、食品加工、烘焙、生物柴油制備、飼料添加劑、再生紙脫墨等廣泛用途。建設其發(fā)酵生產(chǎn)線預計需要800-1000萬元，經(jīng)濟效益可觀。解酯耶氏酵母脂肪酶Lip2可用于油脂水解、轉(zhuǎn)酯、食品加工、烘