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本實用新型涉及一種自動化乳酸菌灌裝裝置，包括儲料罐，儲料罐通過支架固定在底座上，儲料罐底部設置有下料口，下料口上設置有流量開關，下料口底部連接有軟管，軟管底部連接有灌裝頭，灌裝頭上部兩側均設置有橫向的固定桿，固定桿連接有伸縮桿，灌裝頭外側設置有步進電機，步進電機連接有轉軸，轉軸上固定有封板，轉軸另一端連接有位置傳感器，封板下方的灌裝頭內設置有漏斗形的導流罩，灌裝頭下方設置有灌裝座，灌裝座底部設置有稱重傳感器，稱重傳感器、位置傳感器、步進電機、伸縮桿和流量開關均與控制器相連；本實用新型具有結構簡單，成本低，自動化程度高的特點，封板和導流罩的設置防止液體的滴落和溢出，保證灌裝衛生。

本發明公開了一種促進金盞菊開花的乳酸菌制劑，該乳酸菌制劑中的活性菌由短乳桿菌(Lactobacillus brevis)JLD715和植物乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)LP28組成。這兩種菌復合施用后對金盞菊的生長代謝有明顯的影響，即對金盞菊的株高、莖粗、冠幅、單葉最大面積、花期均有促進作用，不但能對金盞菊的生長性狀產生有益的影響，還能延長花期，增大花朵直徑，提高金盞菊的觀賞特性。

可以量產/n本技術體系中的藻、菌聯合處理養殖廢水和養殖廢水循環利用技術可與現行集約化養殖工藝對接。適用范圍廣，處理效率高。收獲的藻菌物質可作為功能性飼料使用，能大大降低處理成本，起到變廢為寶的效果。該技術體系實現畜禽廢水處理成本較現行處理成本降低15%以上。將養殖廢水的COD日均排放降低到150mg/L以下，總氮（TN）降低到20mg/L以下，總磷（TP）降低到5mg/L以下。水質達到《農田灌溉水質標準》GB5084-2005），同時能生產微藻功能性動物和水產飼料。該技術體系適用于全國集約化畜禽養殖

可以量產/n針對當前工業發展對脂肪酶的大量需求與脂肪酶實際表達水平較低 的技術瓶頸，突破了脂肪酶超高效表達技術關鍵，建立了真菌脂肪酶高 效表達技術平臺，構建的疏棉狀嗜熱絲孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL)基因工程菌 10L 發酵，酶活力可達 64,000 U/ml 以上，達到世界報道的最高水平。產品可用于生物能源，制革，油脂水 解、轉酯、酯化，再生紙脫墨等廣泛用途。建設其發酵生產線預計需要 800-1000 萬元，經濟效益可觀。針對當前工業發展對脂肪酶

成果創新點1）解決臨床細菌學檢驗周期長的問題，將 5-6 天的檢 驗周期縮短到 3-6 小時； 2）檢測所需血液量少，可減輕患者痛苦； 3）鑒定結果準確，能特異性檢測病原體； 4）提高檢測過程安全性，不需要進行細菌的擴大培養， 阻止病原菌的擴散，降低院內傳播風險； 5）檢測成本低； 6）操作流程簡單，可進行批量操作； 技術成熟度 本試劑盒通過 PCR 技術擴增病

研究內容 ：本項目采用真空干燥和真空冷凍干燥兩步法生產乳酸菌發 酵菌劑。首先在常溫下通過真空干燥將細胞的含水量降低到 15-30%，最 后在低溫下通過真空冷凍干燥將細胞的含水量降低到 5%以下，可有效防 止細胞內冰晶膨脹、細胞自溶的現象發生，大幅度提高了冷凍干燥過程中 凍干菌劑的存活率，乳酸菌活菌數可達 10cfu/克，超過目前所有市售的乳 酸菌發酵菌劑產品活菌數。 技術優點

1）解決臨床細菌學檢驗周期長的問題，將 5-6 天的檢 驗周期縮短到 3-6 小時； 2）檢測所需血液量少，可減輕患者痛苦； 3）鑒定結果準確，能特異性檢測病原體； 4）提高檢測過程安全性，不需要進行細菌的擴大培養， 阻止病原菌的擴散，降低院內傳播風險； 5）檢測成本低； 6）操作流程簡單，可進行批量操作； 

本成果從一株高產 L-異亮氨酸的 C. glutamicum 出發，運用反向代謝工程策略對其代謝通路進行理性重排，以期實現 L-蘇氨酸高產，特別是近期，通過熱誘導丙酮酸羧化酶和蘇氨酸外排泵創蘇氨酸產率紀錄，開發了一種兩段式溫控發酵蘇氨酸的重組大腸桿菌和工藝，發酵罐蘇氨酸摩爾轉化率達 103.28%。這套復雜中心代謝途徑的自我調控維持了生產和生長的平衡。論文用實驗室前期構建的一株產蘇氨酸的重組大腸桿菌 TWF001 為宿主，首先編輯了涉及副產物有機酸合成、產物降解和轉運的基因，并證實這一系列菌種在 37 度升至 42 度情況下的生長情況等同正常 37 度發酵；然后用一套大腸桿菌熱敏啟動子去轉錄四環素啟動子阻遏蛋白，四環素啟動子后的報告基因 37 度表達，42 度不表達。 

類脂 A 是脂多糖分子的疏水基團，大量存在于革蘭氏陰性細菌的外膜外層，能通過結合免疫細胞表面的受體 TLR4 來刺激人體免疫系統[50, 51]，因而也是一種很好的免疫系統激活因子。美國 Corexa 公司已經開發出了可用于乙肝病毒疫苗和過敏治療的疫苗佐劑 MPL。研究表明 MPL 刺激的免疫細胞中 IL-1β 的分泌量 顯著降低，使得 MPL 的毒性降低但免疫活性還在。MPL 目前是通過從沙門氏菌的 突變株 Salmonella minnesota RC595 中提取類脂 A，然后用化學方法去除其多余的附加基團而得到。本項目擬利用這些類脂 A 修飾酶，根據類脂 A 分子的合成機理，通過基因工程技術將大腸桿菌中類脂 A 的結構改造成為 MPL，構建能合成 MPL 的大腸桿菌。這種新型的能合成 MPL 的大腸桿菌不僅可以作為宿主菌安全使用于食品和藥物的發酵工業生產中，而且可以作為實驗室研究中更安全的基因表達載體，最重要的是它可以直接用來生產類脂 A 疫苗佐劑 MPL。

泛素-蛋白酶體體系（Ubiquitin-Proteasome System，簡稱UPS）是細胞內最重要的蛋白質降解通路，對維持生物體內蛋白質的濃度平衡，以及對調控蛋白、錯誤折疊或受到損傷的蛋白的快速降解起著至關重要的作用，參與了細胞周期、基因表達調控等多種細胞進程，由UPS失常引發的蛋白質新陳代謝異常與眾多人類重大疾病直接相關。2004年，Aaron Ciechanover, Irwin Rose和Avram Hershko三位科學家被授予了諾貝爾化學獎，以表彰他們對該降解通路的發現。UPS中蛋白酶體是細胞中最基本的、最重要的不可或缺的、最為復雜的大型全酶超分子復合機器之一，人源蛋白酶體全酶包含至少33種不同的亞基，總原子質量約為2.5MDa。美國FDA批準的多種治療癌癥的藥物分子即以蛋白酶體為直接靶標。近年來，隨著冷凍電鏡技術的發展和應用，人們對這一大分子機器的結構和功能研究得以不斷深入。2016年，毛有東課題組與合作者報道了人源蛋白酶體基態的3.6?冷凍電鏡結構及其他三個亞納米分辨構象，并首次發現一個亞穩態構象的核心顆粒（Core Particle，簡稱CP）底物轉運通道處于開放狀態（見PNAS 2016, 113: 12991-12996）。2018年4月，該課題組又報道了6個ATPγS結合狀態下的26S動態結構，包括三個CP開放態對應的亞穩簡并態近原子分辨（4~5?）結構（見Nature Communications 2018, 9: 1360）。盡管這些工作揭示了蛋白酶體的基本架構和內在運動行為，但由于缺乏蛋白酶體與底物之間的相互作用，人們對于蛋白酶體如何實現底物降解的原子水平工作機制仍一無所知。此外，盡管冷凍電鏡技術近年來廣泛應用于分析具有動態特征的蛋白復合體結構和平衡態構象，但對其中間態結構和非平衡構象分析的分辨率水平往往局限在4～6埃或更低，離真正的全原子水平動力學分析還有相當一段距離。 為了真正實現原子水平的蛋白酶體底物降解動態過程的冷凍電鏡三維重建和動力學表征，毛有東課題組攻克了兩大技術難題。其一，如何在蛋白酶體完成底物降解之前抓到它的所有可能的中間態構象？課題組發展了一種新穎的核酸置換法，利用ATPγS降低AAA-ATPase激酶水解活性的特點，在底物降解中間過程，通過將ATP快速置換成ATPγS，結合快速冷凍的優勢，從而撲捉到蛋白酶體在底物降解過程的中間態。其二，如何在從冷凍電鏡數據中分析出更多構象的同時，還把分辨率做到3埃甚至更好？課題組通過多年持續努力，發展了多種基于人工智能和機器學習的冷凍電鏡圖像聚類的新型算法，并針對蛋白酶體的動力學特征，設計了一套極其有效的整合了多種算法的多構象分類流程。通過這兩套技術方案的完美結合，課題組成功解析了人源蛋白酶體在降解底物過程中的七種不同的、但差別甚微的、高分辨原子水平的天然態構象（Native states），完整展示了蛋白酶體從泛素結合到去泛素化，再到底物轉運的動態過程。與同期在Science上發表的與底物結合的酵母蛋白酶體的4.2-4.7埃冷凍電鏡結構（Science doi: 10.1126/science.aav0725，來自加州伯克利分校和Scripps研究所）相比，該Nature論文不僅總構象數量多一倍，全部構象分辨率還高1-2埃。由于Science論文采用了抑制Rpn11去泛素活性的策略，其非天然態結構中底物并不能真正自由轉運，所推測的機理僅限于底物轉運這一步，對于其他三大Nature論文所回答重要問題均無法給出答案。這體現了該Nature論文不僅在實驗方法的原創性上和數據分析水平和質量上，更在科學發現和問題探究的深度和廣度上大幅超越了來自Science的競爭性論文。圖一 七個利用冷凍電鏡解析的精細原子結構完整揭示了從泛素識別、去泛素化反應、轉運啟動和持續降解的核心功能動態過程。 作為整個蛋白酶體的動力來源與運轉核心，AAA-ATPase激酶分子馬達展現出了三種不同的核苷酸水解協作模式，6個ATPase亞基協調工作，交替與底物發生相互作用。在去泛素化過程（EB態）中，處于對立位置的兩個ATPase亞基Rpt2與Rpt4水解ATP，而Rpt5與Rpt6則釋放ADP，ATPase內的底物轉運通道被打開，使得底物可以進入軸心通道；與此同時，去泛素化酶Rpn11亞基與泛素及底物發生相互作用，執行其作為去泛素化酶的功能；在轉運起始過程（EC態）中，相鄰的兩個ATPase亞基Rpt1與Rpt5會同時水解ATP，調控顆粒（Regulatory Particle，簡稱RP）發生大規模轉動并釋放泛素；在底物去折疊與轉運過程（ED態）中，三個相鄰的ATPase亞基會分別同步進行ATP的結合、ADP的釋放與ATP的水解，這一過程會單向傳遞下去，將ATP水解釋放的化學能轉換為機械能，使得相應的ATPase亞基發生剛體轉動，推動底物的去折疊和單向輸運，同時CP的轉運通道入口打開，底物被送入通道中進行降解。這些研究結果為幾十年來對蛋白酶體功能的研究提供了寶貴的第一手原子結構和動力學信息，對于理解生物體內蛋白質的降解過程和一系列負責物質輸運的ATPase馬達分子的一般工作原理具有極為重要的科學意義。