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本成果首先參照 GenBank 收錄的 23 株 SAFV P72 蛋白全基因序 列設計一對特異性引物，根據設計的引物探針最佳反應體系和反應條件，并對 建立的 PCR 反應方法進行敏感性、特異性、重復性試驗；其次，參考非洲豬瘟 病毒 Con09/Bzz020 株 p54 基因的核苷酸序列，進行 p54 蛋白的體外表達，并進 一步建立一種間接 ELISA 檢測方法，所建立的兩種檢測方法具有很好的應用性， 能夠用于非洲豬瘟疫病的檢測。同時建立了非洲豬瘟的風險分析和預警技術。 該技術能對非洲豬瘟進行臨床鑒別診斷和預警分析，特異性好，靈敏度高，應 用前景廣闊。 

研發階段/n本成果合成了人工免疫原和包被原，制備出高效價的特異性抗體，建立了肌肉(豬、雞、魚)、肝臟(豬、雞)、腎臟(豬)中AOZ殘留檢測的ELISA方法，并與建立的多殘留檢測HPLC方法進行了對比。該方法的檢測限、回收率、變異系數均達到我國獸藥殘留快速檢測的要求。以上述方法為基礎，在國內首次研制出動物樣品中AOZ殘留檢測ELISA試劑盒。通過與國外同類試劑盒、HPLC法的比對和動物殘留試驗證明，該試劑盒的靈敏度、準確度和重現性與國外試劑盒水平相當。經多家檢測機構和研究單位的復核和應用表明，該試劑盒

研發階段/n本成果合成了人工免疫原和包被原，制備出高效價的特異性抗體，建立了肌肉(豬、雞、魚〉、肝臟(豬、雞)、腎臟(豬)、雞蛋和牛奶中金霉素殘留檢測的ELISA方法，并與建立的多殘留檢測HPLC方法進行了對比。該方法的檢測限、回收率、變異系數均達到我國獸藥殘留快速檢測的要求。以上述方法為基礎，研制出動物樣品中金霉素殘留檢測ELISA試劑盒。該試劑盒的靈敏度、準確度和重現性與國外試劑盒水平相當。經多單位應用表明，該試劑盒靈敏、準確、操作簡便，對金霉素特異性強，適用于金霉素殘留的快速篩選檢測。技術水平

成果先后獲省級科技進步一等獎、國家科技進步二等獎。試劑盒可用于禽白血病流行病學調查和種禽禽白血病的凈化與根除，具有簡便快速，特異性高，費用低，適于大規模檢測等特點。

1. 痛點問題 水中內分泌干擾物、微囊藻毒素等微量有毒污染物對生態環境和人體健康帶來潛在不利影響，已經演變成為全球性關注的重大環境問題。因此，發展微量有毒污染物的快速監測技術，對于應對微量有毒污染物環境與健康風險具有重要的支撐作用和現實意義。 儀器分析技術是水中微量有毒污染物標準檢測技術，然而這類技術需要昂貴的儀器，冗長費力的樣品準備過程和專業的操作人員，限制了此類技術在污染事故應急、現場快速監測等領域的應用。此外，對于總微囊藻毒素這類包含上百種結構變異體的混合物，依賴于化合物結構實現濃度分析的儀器分析技術無法窮盡，特別是捕捉到尚未鑒定出來的微囊藻毒素變異體。免疫分析技術利用抗體對抗原的特異性親和作用，可實現對一種或一類微量污染物的快速高靈敏分析。基于免疫分析原理構建的酶聯免疫檢測試劑盒具有快速、高靈敏、操作簡便、易于標準化等優點，其核心是抗體材料。特別是，為了篩查總微囊藻毒素結構變異體并預警藍藻水華，美國環境保護署于2016年公布了最新的未管制污染物監測規則，其明確推薦發展基于酶聯免疫檢測試劑盒的總微囊藻毒素快速檢測方法，其中，具有微囊藻毒素結構變異體廣譜識別能力的抗體是發展該技術的核心材料支撐。 本項目攻克水中微量有毒污染物免疫檢測中的關鍵瓶頸，有望解決現有技術痛點，為發展水中微量有毒污染物快速ELISA檢測技術提供支撐。 2. 解決方案 針對水中藍藻毒素，發明了一種廣譜型微囊藻毒素單克隆抗體及其制備方法。該抗體能夠特異性識別總微囊藻毒素與節球藻毒素Adda基團，檢出限達到0.1 ng/ml，對12種微囊藻毒素結構變異體交叉反應率55~125%，線性范圍跨越一個數量級，為研發總微囊藻毒素ELISA試劑盒提供了材料支撐。針對水中痕量內分泌干擾物，發明了固相識別雌激素受體的雌二醇衍生物篩選方法，可以篩選出與雌激素受體具有高特異性高親和力的衍生物，進而可以縮短固相雌二醇與雌激素受體結合的時間，增加體外環境下的結合穩定性與親和力；建立了一種利用間接競爭ELISA 高通量快速篩查多種內分泌干擾物的方法，可以實現水中多種內分泌干擾物的同步快速檢測，典型標準曲線測試結果顯示該方法對雙酚A檢出限為3.6 μg/L，定量檢測區間為8.2-264.7 μg/L；對雌二醇檢出限為3.2 μg/L，定量檢測區間為4.2-12.0 μg/L；對壬基酚檢出限為24.8 μg/L，定量檢測區間為8.2-264.7 μg/L。 合作需求 1、尋求在水環境監測系統研發、生產和銷售及運營服務的企業開展技術研發合作； 2、尋求在生態環境、水利、市政等政府部門或事業單位及受環保部門重點監管的污染源企業的環境監測相關應用場景對接資源。

本試劑盒可用于牛結核病的流行病學調查、監測、控制、凈化與根除。該試劑盒檢測靈敏度高、特異性好，與國外進口 BOVIGAM?試劑盒的檢測總符合率達到 95.33%，同時與進口試劑盒相比價格便宜，適于我國臨床牛結核病檢疫的大規模推廣使用，具有十分廣闊的應用前景和經濟價值。

可以量產/n該成果利用純化的乙型腦炎病毒，建立了ELISA抗體檢測試劑盒。該成果主要用于豬的乙型腦炎病毒抗體檢測，可以評價豬乙腦疫苗的免疫效果和感染監測。

一、技術(成果)簡介 本項目組自1999年開始與美國夏威夷大學合作已經開發出我國目前食品及環境中一些常見有毒殘留物的ELISA方法，這些有毒物質包括對硫磷、甲基對硫磷、克百威、甲萘威、2，4-D、鹽酸克倫特羅、己烯雌酚、氯霉素、功夫菊酯、五氯硝基苯、呋喃唑酮、多氯聯苯等。ELISA方法的特異性好，對幾種有毒物的檢測靈敏度均達到ppb級，最低檢測限小于1ppb，該方法與傳統的儀器分析方法的相關性大于95%。檢測樣品只需進行簡單的前處理，單個樣檢測用時短

本發明公開了基于納米抗體檢測甲萘威殘留的ELISA試劑盒及其應用，所述試劑盒包括盒體、設在盒體內的酶標板以及試劑；其中，酶標板的每個孔包被有甲萘威包被抗原，所述試劑包括抗甲萘威納米抗體、甲萘威標準溶液、酶標記的二抗、緩沖液PBS、洗滌液PBST、底物液、顯色液和反應終止液等。檢測過程中，酶標板孔壁上吸附的包被抗原和待測甲萘威相互競爭與抗體反應，通過顯色反應觀察結果。檢測已知濃度的甲萘威并繪制標準曲線，可以推算出待測甲萘威的濃度。本發明的優點是能準確靈敏地檢測水、蔬菜中甲萘威殘留，樣品的前處理過程簡單，耗時少，能同時檢測大量的樣品，樣品檢測成本遠低于傳統的儀器檢測方法。

已有樣品/n豬肺炎支原體間接ELISA抗體檢測試劑盒及應用。　　成果簡介：本發明用原核表達純化的豬肺炎支原體主要免疫原性膜蛋白P46和P65作為包被抗原，建立ELISA方法，并進一步組裝成試劑盒。具有特異性強，靈敏度高，檢測時間短的特點，能夠及時、快速、大規模的監測臨床上的豬肺炎支原體抗體，確定豬群感染動態，采取時效性強的藥物預防或免疫預防或管理措施。　　應用前景：本發明的試劑盒能直接對豬肺炎支原體進行檢測，具有特異性強，靈敏度高，檢測時間短的特點；操作簡單易行，不需由專業人員操作；其穩定性好、保存