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中試階段/n該項目所用的材料是牛皰疹病毒1型BHV-1臨床分離株，具有全部的毒力因子和其他免疫原性很好的抗原。因此，以該病毒為基礎(chǔ)構(gòu)建的牛傳染性鼻氣管炎ΔTK/ΔgE基因缺失標(biāo)志菌株所制備的基因工程疫苗對牛免疫具有很強(qiáng)的針對性，具有廣闊的市場應(yīng)用前景。

  在該研究的訓(xùn)練組和驗證組人群中，CRC診斷模型和預(yù)后預(yù)測模型均表現(xiàn)出了令人滿意的效果。在訓(xùn)練組和驗證組的人群中，該診斷模型準(zhǔn)確率均達(dá)到96%，并且在驗證組中該模型診斷敏感性達(dá)87.9%，特異性達(dá)89.6%，相對于目前臨床常用的結(jié)直腸癌血清標(biāo)志物癌胚抗原CEA的準(zhǔn)確率為67%，診斷準(zhǔn)確度大幅度提高。在對患者預(yù)后預(yù)測的準(zhǔn)確性方面，根據(jù)ctDNA甲基化標(biāo)志物預(yù)后預(yù)測模型計算得到聯(lián)合預(yù)后評分指數(shù)（cp-score）對患者的預(yù)后預(yù)測的準(zhǔn)確性要明顯高于臨床常用的預(yù)后指標(biāo)，如腫瘤原發(fā)部位、TMN分期、CEA等。而將cp-score與這些常規(guī)預(yù)后指標(biāo)結(jié)合以后，對患者預(yù)后預(yù)測的準(zhǔn)確性還能夠得到進(jìn)一步的提高，在訓(xùn)練組患者中對預(yù)后預(yù)測的準(zhǔn)確性達(dá)到82%，在驗證組患者中對預(yù)后預(yù)測的準(zhǔn)確性達(dá)到87%。對預(yù)后的準(zhǔn)確預(yù)測，可很好的指導(dǎo)醫(yī)生對不同的患者進(jìn)行更為個體化的精準(zhǔn)治療，例如對預(yù)后不佳者避免給予過度的治療，而對復(fù)發(fā)高危患者則給予更為積極的輔助治療等。? 研究團(tuán)隊還在前瞻性隊列中驗證了單個ctDNA甲基化標(biāo)志物在結(jié)直腸癌篩查中的價值。通過對1493例結(jié)直腸癌高危人群同時進(jìn)行的腸鏡篩查和血漿ctDNA甲基化檢測結(jié)果進(jìn)行比較，顯示ctDNA甲基化標(biāo)志物可檢測出26例早期腸癌患者，26例進(jìn)展期腺瘤（癌前病變），對腫瘤的檢出敏感性達(dá)89.7%，特異性達(dá)86.8%，對進(jìn)展期腺瘤的檢出率敏感性達(dá)33.3%，敏感性和特異性均較現(xiàn)有的無創(chuàng)篩查方法有所提高。這一研究結(jié)果對于優(yōu)化結(jié)直腸癌篩查，具有重要的意義，有非常廣闊的應(yīng)用前景。       徐瑞華教授團(tuán)隊的這項成果是我國科學(xué)家在腫瘤液體活檢領(lǐng)域又一項具有國際領(lǐng)先水平的重大突破，不僅為CRC的篩查提供了新的方法，也為CRC的精準(zhǔn)診治提供了重要的參考。目前該團(tuán)隊仍在積極開展ctDNA分子標(biāo)志物在其他腫瘤篩查、診斷、預(yù)后預(yù)測、靶向藥物篩選等方面的基礎(chǔ)和轉(zhuǎn)化研究，為發(fā)現(xiàn)更多的早期腫瘤患者，進(jìn)一步改善患者的療效和預(yù)后，提供更多、更有力的工具和手段。

合成了一個具有光敏性的三苯胺橋聯(lián)的三腳架型鉑配合物Pt-tripod，在體外和體內(nèi)都表現(xiàn)出高潛力的DNA靶向光動力治療抗腫瘤效果。機(jī)制研究表明，通過光照，Pt-tripod可以誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生ROS并快速損傷DNA，也包括G-四鏈體DNA（Chem. Eur. J, 2017, 23: 16442–16446.）。在前期研究的基礎(chǔ)之上，毛宗萬教授研究團(tuán)隊在鉑配合物Pt-tripod與G-四鏈體的NMR結(jié)構(gòu)解析上取得了突破性進(jìn)展。實驗研究發(fā)現(xiàn)，Pt-tripod能特異性靶向混合I型人體端粒G-四鏈體DNA，并能顯著抑制端粒酶的活性。利用NMR方法深入探索了Pt-tripod與人體端粒G-四鏈體DNA序列Tel26的動態(tài)結(jié)合。NMR實驗表明，Pt-tripod可以逐漸誘導(dǎo)人體端粒G-四鏈體Tel26形成多個“Pt-tripod-Tel26”復(fù)合物，包括單體、二聚和多聚G-四鏈體與Pt-tripod的復(fù)合物。研究團(tuán)隊確定了其中兩個復(fù)合物的NMR結(jié)構(gòu)，分別是1:1和4:2 Pt-tripod-Tel26復(fù)合物結(jié)構(gòu)。鉑配合物與G-四鏈體復(fù)合物的結(jié)構(gòu)信息為設(shè)計合成特異性靶向混合型人體端粒G-四鏈體的鉑合物提供了結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，同時對研究G-四鏈體DNA與小分子的動態(tài)結(jié)合以及小分子誘導(dǎo)多聚體G-四鏈體高級結(jié)構(gòu)的形成具有指導(dǎo)性意義。

本發(fā)明提供的一種魚腸道微生物宏基因組總DNA的提取方法及試劑盒，其包括：(1)魚樣品取樣及魚體表微生物固定處理；(2)腸道微生物的獲取及菌體的收集；(3)細(xì)胞的包埋與裂解；(4)DNA的提取；(5)DNA保存。試劑盒主要成分：溶液A：為Tris、EDTA的混合溶液；B為Tris、EDTA、NaCl、PVP、異硫氰酸胍、Triton?X100、PMSF、β?巰基乙醇的混合溶液；C為Tris、EDTA、NaCl和DTT的混合溶液；溶液D為蛋白酶K、溶菌酶、Tris、NaCl、SDS的混合溶液；E為Tris飽和酚和氯仿混合液；F為異丙醇；G為乙醇水溶液。本發(fā)明得到的DNA片段純度高，宿主及宿主體表微生物DNA含量少。

研發(fā)階段/n一種豬藍(lán)耳病基因重組豬霍亂沙門氏菌疫苗及應(yīng)用?！　〕晒喗椋荷抽T氏菌是一種胞內(nèi)寄生的革蘭氏陰性腸道桿菌，具有侵襲性。減毒沙門氏菌為載體的基因工程疫苗具有無法比擬的優(yōu)越性，口服該種基因工程疫苗可以在激發(fā)產(chǎn)生抗沙門氏菌免疫應(yīng)答的同時誘發(fā)特異性針對外源蛋白的體液和細(xì)胞免疫。豬藍(lán)耳病是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種以妊娠母豬繁殖障礙以及仔豬呼吸道疾病的高度接觸傳染病，可對豬場造成巨大的損失。本發(fā)明涉及一種豬藍(lán)耳病基因重組豬霍亂沙門氏菌疫苗及應(yīng)用，屬于動物細(xì)菌基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具

01. 成果簡介 中東呼吸綜合征冠狀病毒（MERS-CoV）是2012年在中東地區(qū)首先發(fā)現(xiàn)的一種新型冠狀病毒，與嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒（SARS-CoV）同屬于β冠狀病毒，能夠引發(fā)嚴(yán)重的人類呼吸系統(tǒng)疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織的最新統(tǒng)計表明，MERS-CoV已造成全球27個國家2428例感染，致死率高達(dá)35%。 MERS-CoV表面刺突蛋白（Spike）蛋白是病毒顆粒與細(xì)胞受體二肽基肽酶4（DPP4）作用的關(guān)鍵蛋白，也是MERS-CoV疫苗與保護(hù)性單克隆抗體研究的熱門靶點(diǎn)。本項目團(tuán)隊在靶向刺突蛋白的高活性中和抗體篩選、鑒定、分子結(jié)構(gòu)研究中取得了一系列突破。本團(tuán)隊在國際上首批報道了兩株人源MERS-CoV中和抗體MERS-4與MERS-27，它們均能高效抑制假病毒與活病毒對體外培養(yǎng)細(xì)胞的侵染，在動物模型中也顯示了很好的保護(hù)作用。該團(tuán)隊還綜合運(yùn)用結(jié)構(gòu)生物學(xué)、生物化學(xué)以及病毒學(xué)研究方法闡明了這兩株抗體識別Spike受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域（RBD）的不同位點(diǎn)，并阻斷Spike與受體DPP4的結(jié)合。 本項目團(tuán)隊還利用一種稀有黑猩猩腺病毒AdC68為載體，搭載MERS-CoV表面全長的Spike蛋白，在轉(zhuǎn)基因小鼠（hDPP4-KI）模型中，一次滴鼻免疫即可誘導(dǎo)產(chǎn)生長期保護(hù)性免疫反應(yīng)，并完全預(yù)防小鼠感染或降低感染后的疾病進(jìn)展速度。解決了目前研發(fā)的MERS-CoV疫苗大多需要進(jìn)行多次免疫注射的復(fù)雜程序問題。進(jìn)一步的抗體分析表明，免疫動物血清中含有廣譜高滴度針對RBD的多克隆和單克隆中和抗體，能夠有效阻斷病毒與受體DPP4的結(jié)合，從而解析了其長期保護(hù)性免疫反應(yīng)的分子基礎(chǔ)和機(jī)制，為疫苗下一階段進(jìn)入大動物模型和人體臨床試驗做好了準(zhǔn)備。                        MERS-CoV及其相關(guān)中和抗體和疫苗研究時間軸AdC68-S重組疫苗在hDPP4-KI轉(zhuǎn)基因小鼠模型上的保護(hù)效果02. 應(yīng)用前景 本項成果可應(yīng)用于治療或預(yù)防中東呼吸綜合征冠狀病毒的抗體藥物及疫苗候選物。03. 知識產(chǎn)權(quán) 本項成果已申請4項發(fā)明專利，其中3項已授權(quán)。04. 團(tuán)隊介紹 本項目團(tuán)隊由生命學(xué)院實驗室與醫(yī)學(xué)院實驗室聯(lián)合組成，兩位實驗室負(fù)責(zé)人分別為清華大學(xué)生命學(xué)院和醫(yī)學(xué)院教授、博士生導(dǎo)師，主要研究方向分別為結(jié)構(gòu)生物學(xué)與病毒學(xué)，已發(fā)表國內(nèi)外高水平學(xué)術(shù)論文數(shù)十篇，聯(lián)合申請專利4項。05.合作方式 技術(shù)許可。06.聯(lián)系方式 郵箱：zhangxinrui@tsinghua.edu.cn

隨著世界養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，規(guī)?；曫B(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用和飼養(yǎng)高度密 集，以及突發(fā)腹瀉因素存在，使得豬腹瀉病日趨流行，危害日漸嚴(yán)重。豬傳染 性胃腸炎與流行性腹瀉在養(yǎng)豬場引起豬腹瀉病的報道屢見不鮮，特別是規(guī)?；?豬場在受到藍(lán)耳病、圓環(huán)病等感染之后免疫功能下降時，豬腹瀉類病伺機(jī)暴發(fā)， 導(dǎo)致較嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本成果是利用自主分離鑒定豬傳染性胃腸炎與流行性 腹瀉病毒，通過基因工程的方法，在乳酸菌中進(jìn)行表達(dá)，通過優(yōu)化培養(yǎng)工藝， 提高乳酸菌的培養(yǎng)密度，混合研制的多價口服疫苗，用于該類疾病的免疫預(yù)防。 該產(chǎn)品的開發(fā)為該病的防控起到重要作用，具有重要的應(yīng)用價值和經(jīng)濟(jì)效益。 

腹瀉是導(dǎo)致仔豬死亡的頭號疾病，每年給我國生豬生產(chǎn)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。目前，導(dǎo)致仔豬高發(fā)病率和高死亡率的主要致病原是變異株豬流行性腹瀉病毒（vPEDV）和新現(xiàn)豬丁型冠狀病毒（Porcine deltacoronavirus, PDCoV）。然而，目前國內(nèi)外尚無防控vPEDV和PDCoV感染致病的疫苗。 本科技成果是我校動科院預(yù)防獸醫(yī)學(xué)以唐玉新教授為首的科研團(tuán)隊聚焦于豬腸道腹瀉病原研究，成功分離出穩(wěn)定、高滴度的vPEDV和PDCoV為基礎(chǔ)成功研制而成。PDCoV是導(dǎo)致仔豬腹瀉的新現(xiàn)豬丁型冠狀病毒，該團(tuán)隊在我國大陸本土首先發(fā)現(xiàn)并進(jìn)行了系統(tǒng)研究，成果率先在國際SCI源刊物報道，該論文已成為ESI熱點(diǎn)論文（2015）和高被引論文（2016），實現(xiàn)了江西農(nóng)業(yè)大學(xué)高被引論文零的突破（引自：基于ESI的江西農(nóng)業(yè)大學(xué)優(yōu)勢學(xué)科評估分析報告（第1期），圖書館信息簡報，2017年6月）。vPEDV+PDCoV疫苗創(chuàng)制工作，獲得“十三五”國家重點(diǎn)研發(fā)專項資助（2017YFD0500600），目前已經(jīng)完成實驗室階段等工作，即將進(jìn)入臨床試驗階段；成果目前已經(jīng)轉(zhuǎn)讓給國內(nèi)一家疫苗上市公司，轉(zhuǎn)讓金額1500萬元。本項目研究產(chǎn)品有望成為我國一類新獸藥，上市后，將產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益，據(jù)估算，每年可減少仔豬死亡約1000萬頭，創(chuàng)造直接經(jīng)濟(jì)效益>100億元，對提高生豬生產(chǎn)效益，降低動物病原對人類的威脅，保障人類健康和動物源食品安全，維持CPI穩(wěn)定均可起到十分的重要作用。

國際頂級綜合期刊美國科學(xué)院院刊（PNAS）在線發(fā)表動物醫(yī)學(xué)院孔慶科博士課題組在多糖疫苗研究中的重要研究成果“Synthesis and delivery of Streptococcus pneumoniae capsular polysaccharides by recombinant attenuated Salmonella vaccines”（減毒沙門氏菌疫苗合成及遞送來源于肺炎鏈球菌的多糖抗原）。該研究首次通過合成生物學(xué)，細(xì)菌遺傳學(xué)及免疫學(xué)等方法，將革蘭氏陽性細(xì)菌的表面多糖抗原成功表達(dá)合成于革蘭氏陰性細(xì)菌減毒沙門氏菌的表面，并連接于沙門氏菌內(nèi)毒素的類脂A上，利用遺傳改造及調(diào)控的減毒沙門菌疫苗載體遞送肺炎鏈球菌的多糖抗原開發(fā)新型疫苗。該方法突破了目前固有的陽性細(xì)菌多糖疫苗的構(gòu)建方式，為將來快速、高效的構(gòu)建多糖疫苗奠定了基礎(chǔ)。 博士后蘇華荔及青年教師劉青博士為共同第一作者，動物醫(yī)學(xué)院孔慶科博士為通訊作者，西南大學(xué)為第一完成單位及第一通訊作者單位。美國科學(xué)院院士、佛羅里達(dá)大學(xué)Curtiss教授為共同通訊作者，動物醫(yī)學(xué)院2017級碩士研究生卞曉萍及佛羅里達(dá)大學(xué)王世峰博士參與相關(guān)工作。該研究得到國家自然科學(xué)基金及美國NIH項目的資助。

已有樣品/n豬流行性腹瀉病毒重組豬霍亂沙門氏菌基因工程活疫苗及制備與應(yīng)用?！　〕晒喗椋罕景l(fā)明的重組菌株表達(dá)的是豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒的保護(hù)性抗原基因。其中S蛋白的A、D抗原位點(diǎn)和N蛋白的N321抗原位點(diǎn)是豬傳染性胃腸炎病毒重要的免疫原性基因片段，COE基因和SD基因是豬流行性腹瀉病毒重要的免疫原性基因片段，均具有良好的免疫保護(hù)性。可以同時提供針對豬霍亂沙門氏菌、傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒三種病原的保護(hù)力?！　?yīng)用前景：目前，PED商品化疫苗主要有滅活苗和弱毒苗兩種，這兩種疫苗