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谷氨酸棒桿菌(Corynebacterium glutamicum)被廣泛用于食品工業生產，是一種安全性很高的工業菌株；具有包括 Sec 和 Tat 分泌途徑在內完善的蛋白分泌系統；沒有類似于大腸桿菌(E. coli)所帶來的內毒素和宿主細胞蛋白污染等問題。這些顯著優點使它成為一種有吸引力的外源蛋白表達生產用的底盤細胞。目前國內生物醫藥領域主要依賴于 E.coli 表達體系生產醫藥蛋白，原創性外源蛋白表達體系的缺失，在知識產權方面將制約到我國生物醫藥產業的發展。該項成果有望為我國生物醫藥產業提供一個具有自主知識 產權的谷氨酸棒桿菌安全高效外源蛋白表達體系。

以加壓溶劑提取法為基礎，并以高效液相色譜為檢測手段，考察了無水乙醇作溶劑時，壓力、加壓時間對蒜氨酸提取量的影響。并經過離子交換樹脂柱以及重結晶提純得到蒜氨酸純品。該法無需經過滅酶，避免了高溫或者低溫的工作環境，在室溫下就可以完成蒜氨酸的提取。對比國外普遍采用的超低溫真空破碎分離提取、冷凍干燥等工藝，設備投資小，工藝過程簡單，便于人員操作，對生產人員知識和技術要求不高，易于實現工業化生產。 

項目研究背景： 該工藝以廉價的 L-Cbz-蛋氨酸為原料， 經內酯化反應 得到關鍵的中間體 N-Cbz-L- 高絲氨酸內酯， 再與丙基溴反應對羧基進行保 護得到羥基丁酸丙酯衍生物，然后 PBr3 作為鹵化試劑發生鹵化反應，引 入溴離子離去基，含有離去基的側鏈與 N-羥基鄰苯二甲酰亞胺發生 N-烷 化反應，引入 NH2-O 健，接著在濃鹽酸中脫去保護基并發生水解酞酰亞 胺反應，得到含有

通過微生物育種和基因工程手段相結合，獲得了一株脯氨酸高產菌株黃色短桿菌。發酵培養 65~68 h， L-脯氨酸產量高達 100 g/L，葡萄糖得率為 45%左右。 關鍵技術 (1)本研究以玉米漿為氮源，有效的降低了發酵成本； (2)以葡萄糖和味精為原料生產 L-脯氨酸的高轉化率發酵，該法綠色、環保、可持續，具有經濟競爭力，有很好的產業應用前景。

γ-聚谷氨酸（Poly-γ-glutamic acid）是一種重要的天然聚合物，由 于其具有良好的性質已被廣泛應用于食品，化妝品，醫藥，材料等領 域。解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）LL3 是一株谷氨酸 非依賴型 γ-PGA 合成菌。為了提高其 γ-PGA 產量，項目組采用無痕 基因編輯技術對菌株進行了代謝工程改造。包括三部分：模塊化代謝 通路改造；蔗糖代謝途徑改造；谷氨酸合成途徑改造。 B. amyloliquefaciens LL3 是項目組從發酵食品中分離得到，它能 夠從蔗糖出發合成 γ-PGA。利用模塊化通路改造策略對 γ-PGA 合成 相關的八個代謝通路進行改造包括：γ-PGA 降解相關途徑；細胞呼吸 鏈；胞外蛋白及胞外蛋白酶合成途徑；細菌多糖合成途徑；次級小分 子代謝產物合成途徑；細胞自誘導因子合成途徑；谷氨酸合成途徑以 及 γ-PGA 合成途徑。最終整合獲得的最優基因工程菌株 NK-anti-rocG （敲除了 epsA-O 操縱子（負責胞外多糖合成），sac 操縱子（負責果 聚糖合成），lps（脂多糖合成相關），pta（乙酸合成相關），pgdS（γ-PGA 降解酶），cwlO（細胞壁水解酶），luxS（AI-2 合成）以及表達 anti-rocG sRNA（抑制谷氨酸脫氫酶表達））γ-PGA 搖瓶發酵產量從 3.8 g/L 提高到 11.04 g/L，較對照菌株提高了 2.91 倍。γ-PGA 產物純度也 從 78.6%提高到 95.2%。5-L 罐補料分批發酵實驗得到 NK-anti-rocG 菌株產量可達 20.3 g/L。分子量 450,000 Dal，純度 95%以上。 項目特色： 1. 菌種（Bacillus amyloliquefaciens）LL3 是谷氨酸非依賴型 γ-聚谷 氨酸合成菌株；發酵生產主要原料為蔗糖； 2. 補料分批發酵產量為：20.3 g/L。 3. 授權專利號為：ZL200810053900.7 市場應用前景： γ-聚谷氨酸（Poly-γ-glutamic acid）是一種重要的天然聚合物，由 于其具有良好的性質已被廣泛應用于食品，化妝品，醫藥，材料等領 域。本項目采用谷氨酸非依賴型 γ-聚谷氨酸合成菌做為發酵菌種，以 蔗糖為原料發酵法生產 γ-聚谷氨酸，可產生巨大的經濟效益和社會效 益。

項目簡介 作為一種主要的蛋白質翻譯后修飾，賴氨酸側鏈乙酰化及乙酰賴氨酸側鏈去乙酰化 已在近年證明能有效地調節多個關鍵生命過程，并且也已證明是發展人類疾病藥物（特 別是癌癥）的新型生物靶點。本成果發展了兩個 Fmoc 保護的乙酰賴氨酸類似物（即 Fmoc硫乙酰賴氨酸和 Fmoc-甲磺酰賴氨酸）的有效制備方法及其成功應用于基于 Fmoc 化學的 固相多肽合成。本課題組的前期工作已表明含有這兩個乙酰賴氨酸類似物的肽及肽類化 合物能作為發展下一代抗癌藥物的全新起點以及作為更近一步研究蛋白質乙

用本方法制出的反芻動物飼料添加劑瘤胃保護性賴氨酸鹽酸鹽微膠囊包衣產品，可減少了賴氨酸在瘤胃中的降解，增加了小腸中賴氨酸的數量，克服了賴氨酸鹽酸鹽防潮性能差和存貯不便的缺點。本方法具有時間短、包衣效率高、制粒均勻等優點。

木塑復合材料(wood-plastics composites,簡稱WPC)是利用熱熔塑膠（聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯等以及它們的共聚物）作為膠粘劑,用木質粉料（如木材、農植物秸稈、農植物殼類等生物質物粉料）為填充料,經擠壓法成型或壓制法、注塑法成型所形成的復合材料。木塑復合材料不僅具有原木特有的木質感,而且它具有較好的機械性能、尺寸穩定性好,耐水性、耐磨性、耐化學腐蝕性優良,不怕蟲蛀,易于著色,維護要求低,使用壽命長,易于成型,可二次加工等眾多優異性能。被廣泛的應用到建筑、室內潢、汽車、包裝、倉儲等領域代替木材使用；得到了廣泛應用。 另外它還可充分利用回收木材、余料、木屑等原來被廢棄的木料,大幅度提高天然木材的利用率,并可解決廢棄木料所造成的垃圾污染及處理問題,具有保護環境,提高人造木材制品附加價值的功效，被譽為綠色環保新型材料,具有廣闊的發展前景。

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