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本項(xiàng)目的特點(diǎn)是尿綜合利用聯(lián)產(chǎn)工藝，可將尿激酶、激肽釋放酶，抑肽酶和高純度尿多酸肽四種成分分別提取分離出來，能大大降低成本。高純度高分子尿激酶新工藝曾與中國藥品檢定所共同舉辦了學(xué)習(xí)班，轉(zhuǎn)讓給了四家藥廠還承擔(dān)制作了國家標(biāo)準(zhǔn)品和亞太地區(qū)國際標(biāo)準(zhǔn)品，MW54，000達(dá)100%，而英國制作的樣品只有60%。尿多酸肽是國際上唯一的尿制劑抗癌藥物，但含75%尿素、銨鹽、類黑精、雜醇油等大量雜質(zhì)，副作用大，穩(wěn)定性差。本工藝排雜徹底，提取分離純化手段先進(jìn)，成本低，收率高，純度高，活性高，無副作用。

血管活性腸肽(vasoactiveintestinalpeptide，VIP)是一種由 28 個(gè)氨基酸組成的多肽，主要是由外周神經(jīng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生，由副交感神經(jīng)節(jié)后纖維釋放，并且與乙酰膽堿共同存在，被認(rèn)為是胰高血糖素-胰泌素家族的一員。廣泛分布在中央神經(jīng)系統(tǒng)的類膽堿突觸前神經(jīng)細(xì)胞和外周肽能神經(jīng)細(xì)胞中，通過它可對(duì)多種器官進(jìn)行神經(jīng)支配，比如心臟，肺，消化系統(tǒng)和泌尿生殖道，眼睛，皮膚，卵巢和甲狀腺。VIP 在中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)中是一種重要的信號(hào)肽，通過其受體發(fā)揮生理作用，迄今為止，已有 3 種類型的 V

成果描述：本課題采用理性設(shè)計(jì)的策略，通過基因重組的手段構(gòu)建雜合抗菌肽LfcinB-P-CB，具有活性高、穩(wěn)定性強(qiáng)、無毒等優(yōu)點(diǎn)。通過對(duì)抗菌肽工程菌發(fā)酵優(yōu)化，及抗菌肽純化、制劑工藝研究，建立中試規(guī)模的抗菌肽制劑的制備體系。抗菌效果達(dá)到雜合肽LPCB與Amp（50 μg/mL）抑菌直徑之比大于1.0；耐熱性強(qiáng)，在100 ℃條件下維持3 h活性無明顯降低；有一定的耐酸堿性，在pH 2~10的環(huán)境中仍能保持較高的活性；安全性高，對(duì)真核細(xì)胞幾乎無溶血性；實(shí)現(xiàn)雜合抗菌肽LfcinB-P-CB在畜禽生產(chǎn)中的應(yīng)用，解決抗生素等化學(xué)抗菌材料造成了日益嚴(yán)重的環(huán)境問題，降低某些物質(zhì)會(huì)以原型或代謝物形式排泄造成環(huán)境污染使環(huán)境中出現(xiàn)耐菌株的可能性，從而給人類生存環(huán)境構(gòu)成危害。市場前景分析：據(jù)國外報(bào)道，歐洲各國的養(yǎng)牛業(yè)、養(yǎng)豬業(yè)及養(yǎng)禽場無一例外普遍在配合飼料中添加了上述獸用抗生素作為“動(dòng)物生長促進(jìn)劑”。泰洛星已成為當(dāng)今世界上頭號(hào)獸用抗菌劑，去年泰洛星的銷售額高達(dá)2.75億美元。我國當(dāng)前的動(dòng)物養(yǎng)殖面臨越來越嚴(yán)峻的疫病困擾，因此抗菌肽產(chǎn)品在動(dòng)物保健方面的開發(fā)和應(yīng)用在我國需求巨大。2010年全國動(dòng)物用抗菌肽類產(chǎn)品年銷售額接近一億元，但抗菌肽的總市場容量至少超過100億。因此本項(xiàng)目開發(fā)的抗菌肽具有廣闊的市場前景。與同類成果相比的優(yōu)勢分析：抗菌效果達(dá)到雜合肽LPCB與Amp（50 μg/mL）抑菌直徑之比大于1.0；耐熱性強(qiáng)，在100 ℃條件下維持3 h活性無明顯降低；有一定的耐酸堿性，在pH 2~10的環(huán)境中仍能保持較高的活性；安全性高，對(duì)真核細(xì)胞幾乎無溶血性；

本發(fā)明公開了一種地衣芽孢桿菌分泌的抗菌肽及其制備方法和應(yīng)用。所述的抗菌肽氨基酸序列為序列表SEQIDNO.1所示，分子量為1290.4道爾頓，等電點(diǎn)5.23。其制備方法是：硫酸銨沉淀培養(yǎng)基中地衣芽孢桿菌分泌的的抗菌肽，利用陰離子交換、分子篩層析和反向高效液相色譜法純化抗菌肽。該抗菌肽具有顯著的抗菌活性，且不會(huì)對(duì)豬的紅細(xì)胞產(chǎn)生溶血作用，可用于開發(fā)制備飼用抗菌藥物。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)所謂的疼痛，是一種復(fù)雜的生理心理活動(dòng)，是臨床上最常見的癥狀之一。它包括傷害性刺激作用于機(jī)體所引起的痛感覺，以及機(jī)體對(duì)傷害性刺激的痛反應(yīng)。長期疼痛給患者帶來痛苦和不安，劇痛還可以引起失眠或其他生物功能紊亂，影響患者的生活質(zhì)量。因此，疼痛藥物的研發(fā)一直是全球性的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。阿片類藥物因其止痛作用強(qiáng)，在緩解重度疼痛具有無可取代的地位。然而它們?cè)谄鸬芥?zhèn)痛作用的同時(shí)往往伴隨很多副作用，很大程度上限制了其在鎮(zhèn)痛方面的應(yīng)用。臨床上鎮(zhèn)痛最常應(yīng)用的是阿片藥物，除了眾所周知的副作用外，不同的阿片藥物治療還可產(chǎn)生

疼痛是一種與實(shí)際上或潛在的組織損傷相關(guān)聯(lián)的，或基于這種損傷的，可敘述的不愉快的感覺和情緒經(jīng)驗(yàn)。然而，疼痛特別是長期疼痛給患者帶來痛苦和不安，劇痛還可以引起失眠或其他生物功能紊亂，影響患者的生活質(zhì)量。阿片類鎮(zhèn)痛藥是最古老的鎮(zhèn)痛藥，也是迄今為止最有效的鎮(zhèn)痛藥物，因其止痛作用強(qiáng)，在緩解重度疼痛具有無可取代的地位。但是，由于其諸如呼吸抑制、心搏過緩、耐受、成癮等方面的副作用，對(duì)病人產(chǎn)生了很大的危害，很大程度上限制了其在鎮(zhèn)痛方面的應(yīng)用。從而，另辟蹊徑，發(fā)現(xiàn)新型的低副作用的阿片類鎮(zhèn)痛藥物是目前科學(xué)研究的熱點(diǎn)。&

本發(fā)明公開了一種MMP14雙靶點(diǎn)高效結(jié)合肽及多肽結(jié)構(gòu)序列的獲取方法和目標(biāo)物的用途。從MMP14蛋白誘導(dǎo)表達(dá)的人成骨肉瘤MG63細(xì)胞中篩選和獲得一組新型的雙靶點(diǎn)MMP14和Zn2+的多肽，包括：基于MG63細(xì)胞靶向誘導(dǎo)表達(dá)MMP14的噬菌體隨機(jī)十二肽庫體外消減篩選，經(jīng)3-5輪篩選，獲得富集的雙靶向MMP14和Zn2+的結(jié)合肽噬菌體和多肽結(jié)構(gòu)序列。目標(biāo)物作為先導(dǎo)分子用于疾病治療藥物研發(fā)和用于腫瘤診斷，還可用于蛋白質(zhì)分離純化、分子標(biāo)簽以及重金屬污染生物修復(fù)、采礦等。

本發(fā)明提供了一種新型魚源抗菌肽moronecidin突變體及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明通過生物軟件對(duì)魚源抗菌肽moronecidin的氨基酸序列進(jìn)行空間結(jié)構(gòu)分析，將其22個(gè)氨基酸中的2處氨基酸進(jìn)行突變(K7R和V20K)，同時(shí)為了保證抗菌肽C末端的酰胺化，在C末端添加了天冬酰胺N，獲得一種新型魚源抗菌肽突變體，使其抗菌效力獲得顯著提高。在此基礎(chǔ)上，選用畢赤酵母偏愛密碼子，人工合成新型魚源抗菌肽moronecidin突變體基因，克隆于畢赤酵母中表達(dá)，獲得新型抗菌肽重組酵母菌株，并將發(fā)酵規(guī)模放大到發(fā)酵罐水平，實(shí)現(xiàn)抗菌肽產(chǎn)品的高密度發(fā)酵和高效表達(dá)。發(fā)酵液進(jìn)一步純化后可制成粉劑、液體等抗菌肽制劑用于水產(chǎn)動(dòng)物飼料添加劑或水產(chǎn)動(dòng)物疾病的預(yù)防和治療制劑。

本發(fā)明提供了一種新型豬源抗菌肽突變體及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明通過生物軟件對(duì)豬源抗菌肽PMAP37的氨基酸序列進(jìn)行空間結(jié)構(gòu)分析，將其37個(gè)氨基酸中的3處氨基酸進(jìn)行突變（L6K、K20L和L31K），獲得一種新型豬源抗菌肽突變體，使其抗菌效力獲得顯著提高。在此基礎(chǔ)上，選用畢赤酵母偏愛密碼子，人工合成新型豬源抗菌肽突變體基因，克隆于畢赤酵母中表達(dá)，獲得新型抗菌肽重組酵母菌株，并將發(fā)酵規(guī)模放大到發(fā)酵罐水平，實(shí)現(xiàn)抗菌肽產(chǎn)品的高密度發(fā)酵和高效表達(dá)。發(fā)酵液進(jìn)一步純化后可制成粉劑、液體等抗菌肽制劑用于畜禽疾病的預(yù)防和治療。

本發(fā)明公開了一種以四肽為功能配基的親和層析介質(zhì)及其制備方法。二甲基亞砜溶液中加入抽干基質(zhì)和烯丙基溴進(jìn)行活化；活化基質(zhì)與N-溴代丁二酰亞胺反應(yīng)；將溴代醇化的基質(zhì)與己二胺反應(yīng)，得到氨基活化基質(zhì)；依次用去離子水、無水乙醇和無水N,N-二甲基甲酰胺洗滌，加入含有四肽、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、N,N-二異丙基乙胺的N,N-二甲基甲酰胺溶液，偶聯(lián)四肽配基；將偶聯(lián)四肽的介質(zhì)置于乙酸鈉和乙酸酐的混合液中，得到以四肽作為功能配基的親和層析介質(zhì)。本發(fā)明所研制的新型層析介質(zhì)，功能基團(tuán)為酪氨酸、苯丙氨酸、精氨酸和組氨酸組成的四肽，基于抗體Fc片段的蛋白A結(jié)合位點(diǎn)而設(shè)計(jì)，抗體結(jié)合的選擇性大幅度提高，可以用于抗體的高效分離。