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研究分別建立了食品中克羅諾桿菌常規(guī) PCR 和 Real-time PCR 的快速檢測方法，方法具有很好的特異性和靈敏性，可以應(yīng)用于食品中克羅諾桿菌的檢測。其中常規(guī) PCR 檢測方法選取了兩個(gè)特異性的基因，使得檢測方法具有更高的特異性。Real-time PCR 檢測體系中加入了競爭性擴(kuò)增內(nèi)標(biāo)，大大降低了假陰性發(fā)生的可能性。相關(guān)結(jié)果發(fā)表在國際刊物 Food Control 上，引用次數(shù)達(dá)到 30余次。 

產(chǎn)品詳細(xì)介紹

胞內(nèi)寄生性單增李斯特菌和綿羊李斯特菌能在吞噬細(xì)胞等抗原遞呈細(xì)胞內(nèi)繁殖，引發(fā)高水平的抗原遞呈作用，分別通過MHCⅠ和Ⅱ類途徑引起宿主抗原特異性的CD8+和CD4+ T細(xì)胞免疫反應(yīng)，建立長期有效的免疫保護(hù)記憶，因此可作為一種通用的疫苗載體。本項(xiàng)目以上述兩種李斯特菌為活菌載體搭建新型疫苗構(gòu)建通用平臺(tái)，該平臺(tái)具有以下優(yōu)勢：生物安全——敲除了菌株致病基因，降低了毒性；外源蛋白表達(dá)穩(wěn)定——外源抗原基因整合至細(xì)菌基因組，永遠(yuǎn)不會(huì)丟失；外源抗原具有分泌性——抗原基因融合有分泌信號(hào)肽，使蛋白能分泌到胞外，更有利于免疫刺激；對(duì)環(huán)境、公共健康安全——重組疫苗菌株不攜帶耐藥基因，不會(huì)給環(huán)境和公共健康帶來危害。本平臺(tái)技術(shù)目前已獲得授權(quán)專利，成果屬于國際先進(jìn)水平，已在結(jié)核疫苗及豬繁殖與呼吸綜合癥病毒疫苗的研制上應(yīng)用。該平臺(tái)還可應(yīng)用于腫瘤治療性疫苗及其他預(yù)防病毒和慢性細(xì)菌感染的疫苗的研發(fā)，是一種通用的疫苗構(gòu)建平臺(tái)。

從寒假到現(xiàn)在，清華大學(xué)天津高端裝備研究院表界面微納技術(shù)研究所（以下簡稱清華高端院表界面所）的實(shí)驗(yàn)室里，科研人員已連續(xù)忙碌了好多天。為了趕制捐獻(xiàn)給抗疫醫(yī)務(wù)人員的消毒除菌凝膠，留在天津的研究所員工幾乎全部上崗。由于生產(chǎn)線工人沒有復(fù)工，這些科研工作者們就成了“臨時(shí)工”，實(shí)驗(yàn)室成了“臨時(shí)生產(chǎn)線”。“相比傳統(tǒng)噴灑消毒液的方式，緩釋二氧化氯可以實(shí)現(xiàn)長期持續(xù)消毒，無死角覆蓋，是一種更好的消毒方式。”清華高端院表界面所常務(wù)副所長杜川說。在北京清華長庚醫(yī)院執(zhí)行院長董家鴻院士的建議下，大年初二，高端院應(yīng)急專項(xiàng)小組緊急集結(jié)，針對(duì)除菌消毒的應(yīng)用需求，在之前技術(shù)儲(chǔ)備的基礎(chǔ)上，以最快的速度研發(fā)出以緩釋二氧化氯技術(shù)為核心的消毒除菌凝膠，為這場特殊戰(zhàn)“疫”提供綠色、安全、長期高效的消毒除菌新手段。經(jīng)廣東省微生物分析檢測中心檢測，殺菌率達(dá)到99.9%。一瓶消毒除菌凝膠可以在10—20平方米的房間使用1—2個(gè)月，而且其揮發(fā)濃度僅為美國國家職業(yè)安全衛(wèi)生協(xié)會(huì)建議暴露限值0.1ppm濃度（parts per million）的三分之一，在保證消殺效果的同時(shí)，不會(huì)對(duì)人體健康產(chǎn)生影響。

該技術(shù)利用不同食用菌子實(shí)體或加工副產(chǎn)物，制作不同功效的食用菌系列 凍干方便菌湯，適用于食品加工企業(yè)、凍干食品加工企業(yè)、果蔬加工企業(yè)。解 決了生鮮果、菜、菌加工副產(chǎn)物綜合高效利用問題；將生鮮果、菜、菌的營養(yǎng) 與保健功效與糕點(diǎn)、面點(diǎn)相結(jié)合，改善和提高了普通糕點(diǎn)及面食制品的營養(yǎng)與 功能；增加了糕點(diǎn)及面食制品的花色品種，以滿足消費(fèi)者的多樣化需求。該技 術(shù)可直接對(duì)生鮮果、菜、菌加工副產(chǎn)物進(jìn)行濕法打漿利用，省去了脫水干燥與 粉碎工序，簡化了工藝流程，降低了加工能耗。通過打發(fā)順序的調(diào)整和有關(guān)配 料的應(yīng)用，提高了制品的性能，保護(hù)了原料中的營養(yǎng)與功效成分。

本實(shí)用新型涉及一種乳酸菌復(fù)合菌劑的制備裝置，包括外箱體，外箱體頂部設(shè)置有蒸汽接口，外箱體內(nèi)上部設(shè)置有上端開口的原料箱，原料箱通過管道連接有位于其下方的混合箱，混合箱兩端均通過轉(zhuǎn)軸轉(zhuǎn)動(dòng)固定在固定板上，混合箱底部設(shè)置有凸輪，凸輪連接有位于外箱體外的驅(qū)動(dòng)裝置，混合箱通過管道連接有菌種箱和培養(yǎng)箱，菌種箱通過管道與培養(yǎng)箱相連，菌種箱連接有伸出外箱體外的接種管，培養(yǎng)箱底部設(shè)置有加熱裝置，加熱裝置與控制器相連；本實(shí)用新型通過將原料箱、混合箱、菌種箱和培養(yǎng)箱均設(shè)置在外箱體內(nèi)，方便進(jìn)行蒸汽滅菌消毒，保證培養(yǎng)過程中的無菌無氧環(huán)境，凸輪驅(qū)動(dòng)混合箱搖晃，避免傳統(tǒng)攪拌葉污染培養(yǎng)液的隱患。

本項(xiàng)目涉及功能性醋酸菌/乳酸菌及其發(fā)酵調(diào)控技術(shù)，可用于果蔬飲品、酵素、新型調(diào)味品的發(fā)酵制造。水果、蔬菜等農(nóng)產(chǎn)品由于其保質(zhì)期短，運(yùn)輸成本高，較適宜于在原產(chǎn)地或產(chǎn)地附近進(jìn)行深加工，以延長保質(zhì)期及產(chǎn)品附加值。發(fā)酵類果蔬飲品由于經(jīng)過微生物處理，在口味、質(zhì)地以及營養(yǎng)成分等方面均得到了顯著改善，其中果蔬類益生菌類發(fā)酵飲品，更是得到關(guān)注健康的消費(fèi)人群的青睞。然而目前市場中的發(fā)酵果蔬汁類產(chǎn)品，魚龍混雜，很多產(chǎn)品存在發(fā)酵程度不高；高度依賴后調(diào)配；微生物混亂及發(fā)酵過程控制不科學(xué)；食品安全性不能得到保障等問題。 針對(duì)這一類型的產(chǎn)品，本項(xiàng)目從發(fā)酵菌種、發(fā)酵工藝、功能成分分析以及產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)化等方面系統(tǒng)的進(jìn)行了研發(fā)。 1）豐富的菌種：本課題組擁有近百株背景明確、安全可靠、發(fā)酵性能優(yōu)良 的微生物，形成了完備的釀造用菌種庫，包括乳酸菌、醋酸菌、酵母菌、米曲霉等。可以針對(duì)不同的發(fā)酵原料以及最終產(chǎn)品口感及質(zhì)構(gòu)的要求，選擇一種益生菌或復(fù)合發(fā)酵菌種，實(shí)現(xiàn)個(gè)性化的定制需求。 2）科學(xué)工藝：通過科學(xué)的發(fā)酵工藝及過程控制，實(shí)現(xiàn)了乳酸菌等微生物的高密度培養(yǎng)，活菌數(shù)可達(dá) 100 億/ml。大幅降低生產(chǎn)成本和周期，混菌發(fā)酵可由幾個(gè)月縮短至 10 天內(nèi)，乳酸菌發(fā)酵縮短至 24 小時(shí)內(nèi)。實(shí)現(xiàn)高效的物質(zhì)轉(zhuǎn)化，總酸可以達(dá)到 6%，提高產(chǎn)品品質(zhì)及生產(chǎn)穩(wěn)定性。 3）成分分析：建立了完備的發(fā)酵產(chǎn)品成分分析技術(shù)平臺(tái)。針對(duì)與產(chǎn)品風(fēng)味、以及腸道調(diào)節(jié)、增強(qiáng)免疫等健康功能緊密相關(guān)的有機(jī)酸、短鏈脂肪酸、多酚、多肽等功能成分進(jìn)行精確定量分析以及健康功能評(píng)價(jià)。 4）產(chǎn)品風(fēng)味: 本課題組研發(fā)的果蔬發(fā)酵產(chǎn)品口味濃郁、發(fā)酵特色明顯，無不良異味。避免了發(fā)酵后的過度調(diào)配及添加劑的使用，即可達(dá)到較優(yōu)的感官要求。符合健康、綠色的現(xiàn)代加工食品的需求。 

農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中許多病害發(fā)生、發(fā)展嚴(yán)重，目前在生產(chǎn)中仍以化學(xué)防治為主，由于田間化學(xué)用藥次數(shù)的提高，病菌已產(chǎn)生明顯的抗藥性。如番茄灰霉病是由灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)侵染引起的，是番茄生產(chǎn)中的主要病害，嚴(yán)重影響番茄的產(chǎn)量及品質(zhì)。由于缺乏抗灰霉病的抗原材料，通過常規(guī)方法很難育成番茄灰霉病的抗性品種。傳統(tǒng)的化學(xué)防治不僅高殘留、高污染，且對(duì)葉圍有益微生物區(qū)系造成破壞，自然抗病能力進(jìn)一步減弱。隨著人們生活水平的提高，對(duì)番茄等果蔬產(chǎn)品的品質(zhì)要求越來越高，綠色和有機(jī)食品逐漸成為消費(fèi)市場的主流，市場潛力巨大。在食品安全、環(huán)境保護(hù)、農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的時(shí)代潮流下，研發(fā)新型生物農(nóng)藥逐步取代化學(xué)農(nóng)藥已成為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的重要目標(biāo)，也是經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展的必然趨勢。 利用生防微生物及其次生代謝產(chǎn)物是生物防治的重要手段，我國和世界上許多國家已有商品化微生物農(nóng)藥產(chǎn)品。目前對(duì)于番茄灰霉病的微生物防治研究多數(shù)處于實(shí)驗(yàn)室和溫室階段，田間應(yīng)用的極少，多數(shù)菌劑在田間應(yīng)用過程中防效不穩(wěn)，這是制約微生物菌劑開發(fā)應(yīng)用的一個(gè)瓶頸。此外，多數(shù)研究只是針對(duì)某一種病害，具有廣譜抗性的菌株很少。本實(shí)驗(yàn)室在土壤中分離出一株新的粉紅粘帚菌（WY-1），初步研究表明，該菌對(duì)番茄灰霉病、葉霉病、枯萎病、黃萎病和綿疫病等病原菌均有抑制作用（已獲專利，專利號(hào)ZL2009 1 0072862.4）該菌株是可通過多種機(jī)制共同作用抑制數(shù)種植物病原菌的生防菌，能有效的防治番茄、辣椒等多種作物的灰霉病、葉霉病、枯萎病、黃萎病和綿疫病等，同時(shí)具有較好的促生作用，具有一菌多效的特點(diǎn)。其作用機(jī)制包括競爭、重寄生、溶菌、拮抗和誘導(dǎo)抗性等。由于該生物制劑是一種廣譜抗性的生防菌劑，對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)具有重要的社會(huì)意義。這種以防治番茄灰霉病為主的廣譜性生防菌劑，可以有效的控制保護(hù)地生產(chǎn)病害的發(fā)生，在滿足菜籃子需求的基礎(chǔ)上，更保證了有機(jī)蔬菜的安全生產(chǎn)。

成果與項(xiàng)目的背景及主要用途： 蚯蚓又稱地龍，是以土壤中的動(dòng)植物碎屑為食，經(jīng)常在地下鉆洞，把土壤翻 得疏松，使水分和肥料易于進(jìn)入土壤而提高土壤的肥力，有利于植物的生長；據(jù) 測定，蚯蚓的蛋白質(zhì)含量約占干重的 53.5%-65.1%，脂肪含量約為 4.4%-17.38%， 碳水化合物約為 11%-17.4%，灰分 7.8%-23%。蚯蚓體內(nèi)還含有豐富的維生素 D （約占鮮體重的 0.04%-0.073%），以及鈣和磷（約占鮮體重的 0.24%-0.188%） 等礦物質(zhì)元素，所以蚯蚓可以作為家禽的飼料，是雞鴨喜好的“肉類”食物；蚯蚓 體內(nèi)含有地龍素，地龍解毒素，黃嘌呤，抗組織胺和維生素 B 等多種藥用成分， 可作為很好的藥用材料；此外，蚯蚓還在淡水釣魚中適應(yīng)面廣，各種水域，魚類， 212天津大學(xué)科技成果選編 氣候都較適宜的釣餌。目前養(yǎng)殖蚯蚓，一般以牛糞，豬糞等動(dòng)物糞便及稻草，沼 氣和生活垃圾等為飼料，但這些資源或者數(shù)量少或者難以收集。 近年來，隨著食用菌需求量的不斷增加，以農(nóng)作物秸稈和棉籽殼為培養(yǎng)基料 栽培生產(chǎn)食用菌技術(shù)發(fā)展迅速，并逐步形成規(guī)模化和產(chǎn)業(yè)化。而栽培各種食用菌 類后剩下的底料-菌糠，數(shù)量也大增。據(jù)測定，收菌后的菌糠，粗纖維降解 50%， 木質(zhì)素降解 20%，而粗蛋白含量由原來的 2%提高到 6%-7%，脂肪含量增加 1-5 倍，而且易于粉碎，氣味芳香，適口性好。此外，菌糠中還含有豐富的氨基酸， 多糖及鐵鈣鋅鎂等微量元素，以及一些代謝產(chǎn)物如微涼酚性物，少量生物堿，黃 酮，還含有肌酸多肽植物甾醇及三萜皂苷等化學(xué)物質(zhì)。丟棄不僅浪費(fèi)資源，而且 會(huì)造成環(huán)境污染。因此，菌糠是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中很好的肥料原料，應(yīng)充分加以利用。 技術(shù)原理與工藝流程簡介： 1 對(duì)菌糠的前處理：將食用菌的廢棄培養(yǎng)基菌糠粉碎，噴水?dāng)嚢瑁蛊涑浞?濕潤，且均勻，裝入發(fā)酵罐內(nèi)。 2 加入 40-50℃水使菌糠的含水量在 50%-60%，優(yōu)選 55%，再用 80-85℃的 熱空氣滅菌 16-20 小時(shí)，優(yōu)選 18 小時(shí)，降溫至 30-40℃。 3 加入至少含有 1*108 個(gè)菌/克的菌粉，所述菌粉加入質(zhì)量為菌糠干重的 1.0%-2.5%，所述菌粉為乳酸菌、芽孢桿菌和粉狀畢赤酵母菌株至少一種。通入 30-40℃的空氣，通空氣量為 0.2-0.3L/min*kg 菌糠干重，通空氣 24-36 小時(shí)，然 后密閉發(fā)酵 10-15 天，得到發(fā)酵產(chǎn)物，將所述發(fā)酵產(chǎn)物移除發(fā)酵罐，晾曬 1-2 天。 4 用草木灰和石灰粉調(diào)節(jié) pH 為 6.0-7.0，既制成一種菌糠混合發(fā)酵制備的蚯 蚓餌料。 5 采取室內(nèi)養(yǎng)殖蚯蚓，將制備的蚯蚓餌料均勻鋪在 100*30*30cm 的木盆里， 厚度 10cm，鋪好后，撒上適量的水，餌料的濕度保持在 50%-70%之間。將蚯蚓 均勻撒上，每平方米投放蚯蚓 500g，溫度保持在 15-25℃。蚯蚓投放一天，觀察 無異常反應(yīng)，19 天可擴(kuò)群一倍。 應(yīng)用前景分析及效益預(yù)測： 213天津大學(xué)科技成果選編 本項(xiàng)目克服了現(xiàn)有蚯蚓養(yǎng)殖培養(yǎng)料資源缺乏和菌糠污染環(huán)境的不足，采用菌 糠混合發(fā)酵制備蚯蚓餌料為菌糠的綜合利用及生產(chǎn)高附加值產(chǎn)品（蚯蚓）提供了 一條有效解決途徑。 技術(shù)水平及專利與獲獎(jiǎng)情況： 已獲得相關(guān)授權(quán)專利 應(yīng)用領(lǐng)域：蚯蚓養(yǎng)殖企業(yè)，食用菌生產(chǎn)企業(yè)