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本發(fā)明公開(kāi)了一種斜生纖孔菌鯊烯合酶基因及其編碼的蛋白質(zhì)與用途，本發(fā)明所提供的鯊烯合酶基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或者添加、取代、插入或缺失一個(gè)或多個(gè)核苷酸的同源序列或其等位基因及其衍生的核苷酸序列。所示基因編碼的蛋白質(zhì)具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列或者添加、取代、插入或缺失一個(gè)或多個(gè)氨基酸的同源序列。本發(fā)明提供的鯊烯合酶基因可以通過(guò)基因工程技術(shù)提高斜生纖孔菌中樺褐孔菌醇的含量，可用于利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)來(lái)提高斜生纖孔菌中樺褐孔菌醇含量的研究和產(chǎn)業(yè)化中。而這些次生代謝產(chǎn)物在臨床上具有抗腫瘤、防治艾滋病等潛在的應(yīng)用價(jià)值，對(duì)保護(hù)人民的健康生長(zhǎng)有所幫助。因而本發(fā)明具有很大的應(yīng)用前景。

本發(fā)明公開(kāi)了一種蝶蛹金小蜂毒液絲氨酸蛋白酶抑制劑Pp-PI多肽，其具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。本發(fā)明還同時(shí)公開(kāi)了編碼上述蝶蛹金小蜂毒液絲氨酸蛋白酶抑制劑Pp-PI多肽的基因，其具有SEQ ID NO：1中第126-290位的核苷酸序列；或者與SEQ IDNO：1中從核苷酸第126-290位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者其核苷酸序列能在40-55℃條件下與SEQ ID NO：1中從核苷酸第126-290位的核苷酸序列雜交。上述蝶蛹金小蜂毒液絲氨酸蛋白酶抑制劑Pp-PI多肽能用于制備蝶蛹金小蜂毒液絲氨酸蛋白酶抑制劑，用于轉(zhuǎn)基因作物或改造植物共生菌。

蛋白酶體是細(xì)胞用來(lái)調(diào)控特定蛋白質(zhì)的濃度和清除錯(cuò)誤折疊蛋白質(zhì)的主要機(jī)制，是細(xì)胞中最普遍的不可或缺的大型 蛋白復(fù)合機(jī)器之一，也是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最大的蛋白降解機(jī)器。 蛋白酶體全酶是由蓋子 (Lid)和基座(Base)亞復(fù) 合體組成的調(diào)控顆粒RP(Regulatory Particle)所激活。基座亞復(fù)合體在組裝過(guò)程中最重要的一個(gè)步驟是異質(zhì)六 聚AAA-ATPase環(huán)的組裝。這個(gè)過(guò)程至少需要被PAAF1, p28/gankyrin, p27/PSMD9和S5b這四種調(diào)控顆粒(RP)組 裝伴侶蛋白分子所引導(dǎo)。天然的自由態(tài)19S調(diào)控復(fù)合體的構(gòu)象存在大量的亞穩(wěn)定態(tài)，并表現(xiàn)出大幅度的局部構(gòu)象漲 落，使冷凍電子顯微鏡技術(shù)成為解析其結(jié)構(gòu)的唯一手段。利用 冷凍電鏡解析人源蛋白酶體全酶的基礎(chǔ)上（見(jiàn)PNAS 2016, 113: 12991-12996），利用他們自主開(kāi)發(fā)的基于統(tǒng)計(jì) 流行算法的高性能計(jì)算軟件ROME（見(jiàn)PLoS ONE 2017, 12:e0182130）與優(yōu)化的冷凍電鏡處理方法對(duì)p28-RP復(fù)合 體細(xì)微動(dòng)態(tài)構(gòu)象進(jìn)行深度分類(lèi)，共解析出了1個(gè)4.5-? p28綁定的調(diào)控顆粒（RP）非AAA的亞復(fù)合體，3個(gè)近7-? p28 綁定的完整RP結(jié)構(gòu)，1個(gè)亞納米精度下的非p28綁定的完整RP結(jié)構(gòu)以及7個(gè)亞納米精度下的由Rpn1-p28-AAA組成的p28 綁定RP的亞復(fù)合體的動(dòng)態(tài)構(gòu)象。觀(guān)察到自由態(tài)RP調(diào)控顆粒中p28-綁定的AAA環(huán)并沒(méi)有組成的閉 環(huán)孔狀通道，而是自發(fā)地在Rpt2-Rpt6和Rpt3-Rpt4界面上形成多個(gè)由“開(kāi)”到“關(guān)”的拓?fù)渥儤?gòu)。

二級(jí)肥膘經(jīng)采用本技術(shù)加工，可全部轉(zhuǎn)化為豬油和膠原蛋白，其中豬油的得 率可高達(dá) 60%，膠原蛋白的得率可高達(dá) 20%。投資 800 萬(wàn)元建設(shè)一套年處理 3000 噸二級(jí)肥膘的裝置，可年產(chǎn)豬油 1800 噸，膠原蛋白 600 噸，按豬油 16 元/kg，膠原蛋白 60 元/kg 計(jì)，年產(chǎn)值可達(dá) 6000 萬(wàn)元以上，利潤(rùn)在 1500 萬(wàn)元以上。 

本發(fā)明提供了一種蛋白質(zhì)?殼聚糖復(fù)凝聚食品微膠囊體系及其制備方法，本發(fā)明將蛋白質(zhì)和海藻酸鈉或果膠混合溶解于pH5.0以上的水溶液，然后再與殼聚糖溶液混合，調(diào)節(jié)pH值，低速攪拌使蛋白質(zhì)?殼聚糖–海藻酸鈉或蛋白質(zhì)?殼聚糖?果膠之間發(fā)生復(fù)雜的復(fù)凝聚反應(yīng)，離心收集復(fù)凝聚相后，加入Ca2+，使復(fù)凝聚體系中的?COO?與Ca2+發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，從而提高蛋白質(zhì)?殼聚糖復(fù)凝聚體系的穩(wěn)定性。本發(fā)明只需要通過(guò)控制海藻酸鈉或果膠及Ca2+的添加量及交聯(lián)時(shí)間即可達(dá)到交聯(lián)的目的，不涉及有毒有害試劑，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單易行、安全高效，易于規(guī)模化生產(chǎn)，對(duì)于包埋各種功能性成分具有廣闊的市場(chǎng)前景。

研發(fā)階段/n本發(fā)明提供一種蛋白質(zhì)分子印跡膜，能夠選擇性識(shí)別結(jié)合模板蛋白質(zhì)分子，是以魔芋葡甘聚糖為主要基質(zhì)，其制備方法是將魔芋葡甘聚糖充分溶脹后，加交聯(lián)劑或與其它高分子共混，中和后加入模板蛋白質(zhì)分子，充分混合后流涎成膜，干燥脫水形成模板蛋白質(zhì)的分子印跡，加洗脫液充分洗脫模板蛋白質(zhì)分子后制成魔芋葡甘聚糖蛋白質(zhì)分子印跡膜。本發(fā)明所得蛋白質(zhì)分子印跡膜，可作為生物分離模擬親和膜應(yīng)用于蛋白質(zhì)分離純化，尤其是基因工程蛋白質(zhì)產(chǎn)品的分離純化，生物傳感檢測(cè)中的敏感膜部件以模擬抗體識(shí)別相應(yīng)抗原等。

本發(fā)明公開(kāi)了一種基于反蛋白石結(jié)構(gòu)水凝膠的心肌細(xì)胞檢測(cè)方法及其應(yīng)用，包括以下步驟：1)制備生物相容性的反蛋白石結(jié)構(gòu)水凝膠；2)基于反蛋白石結(jié)構(gòu)水凝膠心肌細(xì)胞的培養(yǎng)；3)心肌細(xì)胞的檢測(cè)；4)數(shù)據(jù)的分析。本發(fā)明中的反蛋白石結(jié)構(gòu)色水凝膠具備良好的生物相容性，細(xì)胞在其表面生長(zhǎng)保持高活性和表型，反蛋白石結(jié)構(gòu)水凝膠不僅為心肌細(xì)胞的生長(zhǎng)提供載體，更重要的是為心肌細(xì)胞收縮力和跳動(dòng)頻率的檢測(cè)提供穩(wěn)定的光學(xué)傳感信號(hào)，該檢測(cè)方法不需要復(fù)雜的檢測(cè)系統(tǒng)，具備直觀(guān)性、高靈敏行、高效、不受外界條件影響的優(yōu)勢(shì)；該方法可應(yīng)用于心臟藥物

本發(fā)明公開(kāi)了一種過(guò)氧化物氧化還原酶Prx?I重組蛋白在制備抵抗急性細(xì)菌性敗血癥藥物中的應(yīng)用，所述的重組蛋白是在過(guò)氧化物氧化還原酶Prx?I氨基酸序列的N端或C端連接回輸肽蛋白構(gòu)建而成；所述回輸肽的氨基酸序列為5’-AAVLLPVLLAAP-3’；本發(fā)明首次提供了過(guò)氧化物氧化還原酶Prx?I重組蛋白除了具有分解H2O2的經(jīng)典生化功能外，還具有新的抵抗急性細(xì)菌敗血癥的免疫學(xué)功能；通過(guò)對(duì)該蛋白分子進(jìn)行重組改造，顯著增強(qiáng)活性蛋白進(jìn)入細(xì)胞的效率，通過(guò)提高利用效率而賦予其具有更高的生物學(xué)活性，從而降低生產(chǎn)成本，具有良好的應(yīng)用前景。

【發(fā) 明 人】劉培；唐宗湘；段金廒；楊雁；劉睿；于金高 【摘要】 本發(fā)明公開(kāi)了一種具有致癢作用的芋蛋白提取物，它的氨基酸序列為：Ser-Gln-Leu-Asn-Phe- Tyr-Gln-Gly-Lys-Gly-Gln-Gly-Asn-Phe-Leu-Val-Ala-Val-Asp。本發(fā)明通過(guò)采用超濾、離子交換層析、凝膠柱層析、超濾或透析除鹽等技術(shù)，制備得到純度高，具有很好致癢活性的芋蛋白提取物，該芋蛋白提取物可廣泛應(yīng)用于致癢模型工具藥研究、生物檢測(cè)、疾病診斷和治療等方面，為芋資源的綜合高效利用提供基礎(chǔ)，具有重要的意義。

常規(guī)治療腫瘤的方式有手術(shù)切除、化學(xué)治療、放射治療及生物治療等，然而這幾種療法并非對(duì)所有腫瘤都適宜。手術(shù)治療在這些腫瘤中明顯受到限制。對(duì)大多數(shù)中晚期惡性腫瘤患者急待尋求新的有效的非手術(shù)治療手段。常規(guī)放射性治療由于輻射面積較大、放射性射線(xiàn)劑量大和貫穿人體，對(duì)人體的正常組織結(jié)構(gòu)損傷很大。核素微球和核素粒子是代表腫瘤治療和介入放射治療領(lǐng)域的新一代的藥物。與常規(guī)外照射治療相比，目前核素微球和核素粒子治療惡性腫瘤是最先進(jìn)也是最常用放射治療方法之一。 1)核素微球 近年來(lái)正在研究的核素微球包括釔-90玻璃(樹(shù)膠)微球、錸-188玻璃微球、磷-32玻璃微球和鈥-160玻璃微球。其中釔-90微球正被醫(yī)學(xué)界迅速接受并成為肝臟原發(fā)和繼發(fā)惡性腫瘤的重要治療手段。1999年該藥物已被美國(guó)和加拿大正式批準(zhǔn),成為該腫瘤的治療方式。碘-125粒子是一種核素粒子，它是在CT和超聲引導(dǎo)下植入，將發(fā)出低能量γ射線(xiàn)的碘125粒子直接植入腫瘤組織內(nèi)，對(duì)腫瘤組織進(jìn)行持續(xù)性的、最大程度的毀滅性殺傷。 2)核素粒子 碘-125粒子優(yōu)勢(shì)明顯：內(nèi)照射射線(xiàn)劑量小，作用時(shí)間更長(zhǎng)，治療定位更準(zhǔn)確，對(duì)腫瘤局部作用均勻，輻射半徑小，對(duì)周?chē)＝M織損傷極小，是一種非常好的局部治療措施。和化療配合，治療腫瘤的效果更加明顯。 該技術(shù)對(duì)腫瘤的局部治療可以達(dá)到或接近手術(shù)和其他毀損病灶療法的效果。對(duì)于某些經(jīng)手術(shù)后，出現(xiàn)復(fù)發(fā)或者局部轉(zhuǎn)移的腫瘤，碘-125粒子植入具有明顯優(yōu)勢(shì)。此外，如作為常規(guī)放射治療的補(bǔ)充和協(xié)同治療的手段，會(huì)取得更好的治療效果。 碘-125粒子植入并非只是治療腫瘤的輔助方式，而是治療腫瘤的主要手段，而且對(duì)某些腫瘤可以作為優(yōu)先選擇的治療方法。 對(duì)于一些對(duì)常規(guī)放、化療不敏感的腫瘤，碘-125粒子植入是一項(xiàng)重要的治療措施。如前列腺癌，過(guò)去常用手術(shù)切除、放療和化療綜合治療，其效果并不理想。而直接植入碘125粒子抑制腫瘤生長(zhǎng)，避免了手術(shù)，能達(dá)到與常規(guī)治療一樣或更好的效果，并且保留了它的生理功能。另外，對(duì)于不愿行根治性手術(shù)以及一些無(wú)法手術(shù)的子宮頸癌、鼻咽癌患者，碘-125粒子的效果也非常明顯。 此外，對(duì)于已發(fā)生轉(zhuǎn)移的腫瘤患者，選用碘-125粒子植入治療，可達(dá)到有效控制轉(zhuǎn)移灶生長(zhǎng)、保持器官功能、減輕疼痛的目的；由于身體狀況、腫瘤位置等因素影響，無(wú)法用手術(shù)切除的腫瘤，也可選用植入碘-125粒子治療。 3）利卡汀 利卡汀為水針劑，主要成分是碘125標(biāo)記的美昔單抗。依靠美昔單抗與肝癌細(xì)胞表面表達(dá)的CD147抗原結(jié)合，再由碘125發(fā)揮局部放療作用。該藥I、II、III期臨床試驗(yàn)均在華西醫(yī)院完成。證實(shí)能夠延長(zhǎng)肝癌患者生存率。 2、項(xiàng)目技術(shù)背景 由于多數(shù)用于治療的核素對(duì)人體的骨髓等多種組織具有嚴(yán)重的毒、副作用，目前世界上近距離放射治療均采用金屬或玻璃為載體以盡量減少釋放帶來(lái)的全身副作用。但金屬和玻璃等,具有體內(nèi)難以降解、技術(shù)操作復(fù)雜、分布性差、價(jià)格昂貴等缺點(diǎn)。本研究將采用可降解的蛋白質(zhì)明膠微球作為碘核素的載體。明膠是膠原蛋白部分水解的產(chǎn)物，具有生物相容性好、可以生物降解、可和多種核素和藥物穩(wěn)定結(jié)合等優(yōu)點(diǎn)。 碘131和碘-125是多年臨床治療惡性腫瘤的常用核素，其治療效果穩(wěn)定。碘核素的最大優(yōu)越性是毒副作用較輕，碘在體內(nèi)主要被甲狀腺組織吸收，其他組織絕少停留。不同粒徑的碘-125蛋白核素微球通過(guò)血管介入和局部植入可在腫瘤局部進(jìn)行近距離放射治療。例如：直徑50-70μm的微球經(jīng)介入途徑給藥后主要停留在小動(dòng)脈和腫瘤血管中。可用作放射栓塞劑和化療栓塞劑，治療血管豐富的實(shí)體腫瘤，如肝癌、腎癌、子宮腫瘤等；直徑10-20μm的微球可通過(guò)瘤體注射的方法較均勻地分布在腫瘤組織間。可以對(duì)各種實(shí)體瘤進(jìn)行瘤體植入近距離放療和局部化療，可用于乳腺癌，甲狀腺癌,胰腺癌，胃腸實(shí)體瘤等。 項(xiàng)目組長(zhǎng)曾于1990年作為副組長(zhǎng)在國(guó)家自然科學(xué)基金的資助下完成結(jié)合碘131和化療藥物的明膠微球肝動(dòng)脈注射治療晚期肝癌的基礎(chǔ)和臨床研究。此次研究將在以前的工作基礎(chǔ)上，結(jié)合國(guó)內(nèi)外的最新發(fā)展趨勢(shì)，改進(jìn)并研制新的核素蛋白質(zhì)微球。該項(xiàng)目作為上述課題的延續(xù)，目的是繼續(xù)完善該藥品的臨床前研究，繼以實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。