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本發(fā)明涉及分子微生物學(xué)領(lǐng)域，具體的說是一種C型凝集素(C-type?lectin)及其制備和應(yīng)用。C型凝集素為序列表SEQ?ID?No.1中的氨基酸序列所示。制備方法：以許氏平鮋cDNA為模板PCR擴增C型凝集素基因，構(gòu)建質(zhì)粒pLecC；將pLecC轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21Transetta(DE3)，對轉(zhuǎn)化子進行誘導(dǎo)表達后，收集上清，濃縮后即得重組C型凝集素。所述C型凝集素對多種弧菌具高效凝集作用，經(jīng)C型凝集素處理后的細菌對許氏平鮋的侵染能力顯著降低。因此，該C型凝集素有望應(yīng)用于魚類細菌性病害的防治。

本項目是采用種子蛋白質(zhì)基因工程手段，將富含賴氨酸的豌豆球蛋白基因（Vicilingene）轉(zhuǎn)入超大穗小麥體內(nèi)并令其表達，以期大幅度提高超大穗小麥的種子蛋白質(zhì)含量和賴氨酸含量，改良超大穗小麥的營養(yǎng)品質(zhì)和加工品質(zhì)，使超大穗小麥盡快成為大面積推廣種植的超高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)小麥良種。其次，本項研究將豐富分子遺傳學(xué)理論并開辟一條高蛋白品質(zhì)育種的新途徑，所

Mpa六聚體除了與真核生物蛋白酶體調(diào)節(jié)顆粒Rpt1-Rpt6蛋白六聚體以及古細菌PAN蛋白六聚體具有一定的結(jié)構(gòu)同源性之外，還具有一些明顯不同的結(jié)構(gòu)特征：（1）結(jié)核桿菌Mpa具有形成雙環(huán)的兩個串聯(lián)寡核苷酸/寡糖結(jié)合（OB）結(jié)構(gòu)域，而古細菌蛋白酶體相關(guān)ATPase調(diào)控顆粒（PAN）和真核生物蛋白酶體ATPase調(diào)控顆粒復(fù)合體（Rpt1-6）每個蛋白亞基都只具有單個OB結(jié)構(gòu)域；（2）Mpa在具有蛋白酶體活化功能的C末端之前具有一個泛素樣的β-grasp結(jié)構(gòu)域，而古細菌PAN和真核生物Rpt1-6蛋白復(fù)合體并不具有這樣的一個β-grasp結(jié)構(gòu)域? 由于β-grasp結(jié)構(gòu)域的存在，Mpa六聚體中各個蛋白亞基C末端被埋在結(jié)構(gòu)核心中而沒有暴露在蛋白復(fù)合體結(jié)構(gòu)的表面，這就影響了C末端的GQYL基序與20S 蛋白酶體復(fù)合體的對接，從而阻礙了六聚化的Mpa與七次對稱的28聚體的蛋白酶體相互作用。我們通過功能研究進一步解釋了為什么單獨的Mpa六聚體在體外情況下不能有效結(jié)合蛋白酶體核心顆粒并啟動蛋白質(zhì)特異性降解，結(jié)合晶體結(jié)構(gòu)域功能研究，我們提出了結(jié)核桿菌蛋白酶體ATPase調(diào)控顆粒Mpa與20S蛋白酶體復(fù)合體這一分子量超過1100KDa蛋白質(zhì)機器的作用模型

1.痛點問題 自身免疫系統(tǒng)疾病是困擾人類的一大類疾病，醫(yī)學(xué)界對其中很多種疾病的具體發(fā)病原因還所知甚少。目前的治療手段和方法也極其有限，幾乎沒有任何真正的靶向藥物和能夠根治的療法，其治療難度和患者痛苦程度都不亞于癌癥。 IRAK4是固有免疫系統(tǒng)上IL-1家族和TLR家族這兩大信號通路交匯的最重要的節(jié)點。IRAK4和MyD88通過形成復(fù)合物來開啟下游各種與免疫反應(yīng)或細胞生長相關(guān)的基因表達。IRAK4與其他激酶不同，它既是下游信號分子的激酶，又同時起到形成復(fù)合物所必需的支架蛋白的作用。雖然，現(xiàn)有技術(shù)已有眾多IRAK4小分子激酶抑制劑，但它們僅可以抑制激酶本身的活性，顯示出中等的效力，無法破壞復(fù)合物的形成來徹底阻斷炎癥反應(yīng)信號的產(chǎn)生。而PROTAC技術(shù)可通過降解靶蛋白同時阻斷IRAK4激酶活性和破壞靶蛋白支架功能，相對于常規(guī)的激酶抑制劑產(chǎn)生更好的抑制炎癥反應(yīng)效果。 2.解決方案 本項成果涉及一類可以降解IRAK4蛋白的小分子降解劑，可以同時消除IRAK4蛋白的激酶功能和支架蛋白功能。相較于小分子抑制劑，該類小分子降解劑有更強的抑制炎癥反應(yīng)的效果。有望用于開發(fā)新型、高效、新機制的抗炎小分子藥物，同時拓展該類分子在癌癥治療中的作用。 PROTAC是一種具有雙功能的雜合小分子，通過合適的連接鏈將靶蛋白配體與E3泛素連接酶配體連接，促使目的蛋白（POI）與E3連接酶形成三元復(fù)合物，從而使靶蛋白接近泛素化系統(tǒng)，實現(xiàn)靶蛋白的泛素化，隨后被蛋白酶體的26S亞基識別，最終導(dǎo)致靶蛋白降解。 合作需求 項目合作開發(fā)、落地空間、研發(fā)團隊或第三方資金投入。

本發(fā)明涉及一種消除發(fā)酵豆粕中β?伴大豆球蛋白的方法。該方法包括如下步驟：(1)調(diào)節(jié)豆粕的含水量在20％～25％(重量比)；(2)用110℃～125℃的蒸汽處理步驟(1)得到的豆粕，出料、冷卻；(3)對步驟(2)得到的豆粕接種酵母菌和屎腸球菌，調(diào)節(jié)接種物料的含水量在38％～42％(重量比)；(4)對步驟(3)得到的豆粕進行厭氧發(fā)酵。本發(fā)明能夠顯著地降低

本發(fā)明成功將 EAMM 蛋白和抗原 HspX 在基因水平進行融合構(gòu) 建了新的融合蛋白 EAMMH，并將該不帶標(biāo)簽的融合蛋白成功進行表 達和純化。EAMMH 融合蛋白以可溶形式表達，明顯改善了 EAMM 以包涵體進行表達的狀況。此外，EAMMH 蛋白融合了結(jié)核分枝桿菌 主要的生長期抗原和休眠期抗原，并可誘導(dǎo)較強的針對各期抗原的特 異性細胞免疫和體液免疫應(yīng)答。小鼠結(jié)核分枝桿菌氣霧攻擊模型證 明，該新的融合蛋白疫苗具

現(xiàn)有伴隨診斷主要是基因檢測，而基因突變并不等于蛋白質(zhì)表達，更不意味著靶點激活。本項目基于蛋白組學(xué)，特異性捕獲磷酸化酪氨酸激酶（最主要靶點），直接檢測靶點激活狀態(tài)，極低成本為腫瘤用藥提供最精準指導(dǎo)。

本發(fā)明涉及一種新型的G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)細胞水平篩選系統(tǒng)及其構(gòu)建方法與應(yīng)用。所述篩選系統(tǒng)由HEK293細胞或CHO細胞構(gòu)建，含有來自以下序列中不同組間基因序列構(gòu)建的2種融合表達載體：第1組：(1)DnaE基因的C端與報告基因的C端的拼接序列：DnaE-C-Report-C，(2)DnaE基因的N端與報告基因的N端的拼接序列：Report-N-DnaE-N；第2組：①GPCR基因，②β-arrestin基因。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：應(yīng)用本發(fā)明篩選系統(tǒng)進行G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)細胞水平篩選，靈敏度高、特異性強，操作簡單、快速，檢測范圍廣，對任何靶細胞型中任何GPCR或GPCR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的激動劑、拮抗劑都可以篩選。

本發(fā)明成功將EAMM蛋白和抗原HspX在基因水平進行融合構(gòu)建了新的融合蛋白EAMMH，并將該不帶標(biāo)簽的融合蛋白成功進行表達和純化。EAMMH融合蛋白以可溶形式表達，明顯改善了EAMM以包涵體進行表達的狀況。此外，EAMMH蛋白融合了結(jié)核分枝桿菌主要的生長期抗原和休眠期抗原，并可誘導(dǎo)較強的針對各期抗原的特異性細胞免疫和體液免疫應(yīng)答。

真菌疏水蛋白具有自我裝配成膜的性質(zhì)，因此 （1）疏水蛋白可作為蛋白和細胞固定化的媒介，可用于生物傳感器和生物芯片，作為引發(fā)層，交聯(lián)上配體或形成融合蛋白，能使特定分子固定化到特定表面。 （2）它能改變表面的屬性，保護表面。可用于提高醫(yī)學(xué)器官移植物生物相容性和防止微生物細胞粘附；可應(yīng)用于醫(yī)藥行業(yè)中燒傷、創(chuàng)傷的創(chuàng)面保護，為臨床病人創(chuàng)面保護和恢復(fù)提供一種安全無毒、操作簡便、高效低耗的新手段。 （3）作為一種生物表面活性劑，疏水蛋白還可以用于促進土壤中的污染物的降解和應(yīng)用在石油泄漏后回收石油的過程中。 （4）疏水蛋白具有表面活性，可用于食品對抗相變能力并形成穩(wěn)定泡沫，使其在密封食品生產(chǎn)上發(fā)揮重要作用； （5）也可用于日用化妝品生產(chǎn)中，因疏水蛋白可以作為洗潔產(chǎn)品的成分，根據(jù)其疏水、親水兩相間的轉(zhuǎn)變，可通過自我裝配而將面部的油脂等疏水的成分包裹起來，再用水清洗將其除去，也可以作為保護秀發(fā)的天然膜，使發(fā)部維持清潔并保持一定水分；將它運用到面部的美容護理，由于它的特性，能使皮膚表面形成一層天然生物活性保護膜，起到皮膚保濕、免受外界空氣中污濁物的侵害，從而達到護膚美容之功效。 （6）疏水蛋白直接包裹藥物以改變藥物溶解性并實現(xiàn)控、緩釋。通過真菌疏水蛋白與難溶于水的藥物混合，可以達到良好的分散效果，并延長了兩種藥物的藥效持續(xù)時間。 （7）真菌疏水蛋白與其他的功能性蛋白或小肽組成融合蛋白，同時發(fā)揮疏水蛋白的穩(wěn)定吸附材料表面的特性和功能性蛋白或小肽的特異性功能，如在組織工程、抗炎抗菌材料等。 項目特色： 純天然生物制品，無毒害，無污染。耐酸堿，抗相變能力強。自我裝配形成有活性的蛋白膜。具有良好的熱穩(wěn)定性和透氣不透水性。由于它的特性，使得它具有：（1）自動成膜，無需貼敷，使用便利；（2）透氣性優(yōu)良；(3)純天然無化學(xué)添加成分，瑞氏木霉已被證明是安全的菌種；（4）組織相容性好，避免了嚴重的排異反應(yīng)；（5）耐高溫（100 攝氏度仍保持活性），易于消毒；（6）穩(wěn)定不降解，便于產(chǎn)品的長期保存；（7）用表面活性劑就可以很容易地清洗（8）延展性好，1 毫克的疏水蛋白在液面就可以展開 1 平方米的薄膜（9）透明，可直接透過成膜觀察（10）性價比高。 市場應(yīng)用前景： 目前國際上尚未實現(xiàn)疏水蛋白的工業(yè)化生產(chǎn)，其相關(guān)應(yīng)用產(chǎn)品的開發(fā)更為滯后。我們在已實現(xiàn)疏水蛋白中試研發(fā)的基礎(chǔ)上，擴大發(fā)酵規(guī)模，進行后續(xù)產(chǎn)品的開發(fā)，我們的技術(shù)和工藝現(xiàn)居國際領(lǐng)先地位，無疑會占有寶貴的先機。 疏水蛋白產(chǎn)品將作為新一代膜生物活性材料進入市場，它的出現(xiàn)將會革命性地取代現(xiàn)有化學(xué)產(chǎn)品，這無疑給人類的健康帶來了很大的益處，消除人類在預(yù)防和治療疾病、食品加工、以及醫(yī)學(xué)檢測、食物保鮮方面為健康做出努力的同時給自身帶來的潛在危害，而且價格更為低廉。因此，本項目大規(guī)模生產(chǎn)疏水蛋白及其應(yīng)用開發(fā)是有非常廣闊的市場前景的，并且我們的技術(shù)在國際和國內(nèi)市場處于領(lǐng)先地位。這些產(chǎn)品都將在國際市場上處于最優(yōu)競爭狀態(tài)。