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研發(fā)階段/n本成果合成了人工免疫原和包被原，制備出高效價的特異性抗體，建立了肌肉(豬、雞、魚)、肝臟(豬、雞)、腎臟(豬)中AOZ殘留檢測的ELISA方法，并與建立的多殘留檢測HPLC方法進(jìn)行了對比。該方法的檢測限、回收率、變異系數(shù)均達(dá)到我國獸藥殘留快速檢測的要求。以上述方法為基礎(chǔ)，在國內(nèi)首次研制出動物樣品中AOZ殘留檢測ELISA試劑盒。通過與國外同類試劑盒、HPLC法的比對和動物殘留試驗(yàn)證明，該試劑盒的靈敏度、準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性與國外試劑盒水平相當(dāng)。經(jīng)多家檢測機(jī)構(gòu)和研究單位的復(fù)核和應(yīng)用表明，該試劑盒

該研究發(fā)現(xiàn)RNA病毒感染宿主細(xì)胞可誘導(dǎo)表達(dá)一種新型自噬受體CCDC50，該自噬受體通過識別K63型泛素化修飾的RNA病毒模式識別受體RIG-I/MDA5（RLR）并介導(dǎo)后者的自噬途徑依賴的降解，從而抑制病毒感染誘導(dǎo)的I型干擾素的產(chǎn)生，幫助機(jī)體恢復(fù)到靜息狀態(tài)，避免過度免疫反應(yīng)造成的組織損傷和自身炎癥。我校博士后侯盼盼為論文第一作者，郭德銀教授為通訊作者，我校醫(yī)學(xué)院、附屬第七醫(yī)院為第一作者單位。       天然免疫是一種非特異性的宿主抵抗病原微生物入侵的免疫反應(yīng),它廣泛存在于機(jī)體的絕大部分細(xì)胞，被認(rèn)為是機(jī)體抵抗病原體感染的第一道防線。隨著近幾十年的研究，人們對天然免疫系統(tǒng)愈發(fā)了解，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并鑒定出天然免疫反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)控因子和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子，然而某些重要調(diào)控因子的結(jié)構(gòu)和功能機(jī)制依然不清楚，且這些調(diào)控因子的生理和病理作用尚有待于研究。郭德銀教授課題組利用CRISPR/Cas9第二代文庫在免疫細(xì)胞中進(jìn)行了全基因組水平的大規(guī)模無偏差篩選，發(fā)現(xiàn)了一系列參與天然免疫反應(yīng)調(diào)控的新型基因。進(jìn)一步的驗(yàn)證過程中發(fā)現(xiàn)CCDC50蛋白在RNA病毒感染下表達(dá)量顯著增加且其表達(dá)模式和RLR的表達(dá)模式一致，提示著CCDC50可能參與調(diào)控RLR介導(dǎo)的信號通路活性。為了進(jìn)一步驗(yàn)證該觀察結(jié)果，該課題組構(gòu)建了CCDC50條件缺失的小鼠模型，攻毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明缺失CCDC50后，病毒感染條件下，I型干擾素表達(dá)上調(diào)，其下游的ISGs表達(dá)水平也隨之升高，小鼠清除病毒能力增強(qiáng)，肺部組織損傷和炎性浸潤減少，且小鼠存活率增加，從而證明CCDC50在機(jī)體水平具有生理學(xué)功能。       進(jìn)一步的機(jī)制探究中，該課題組發(fā)現(xiàn)CCDC50特異性識別K63泛素化修飾的RLR，并促進(jìn)激活的RLR的自噬途徑依賴的降解，此機(jī)制不同于以往了解較多的K48泛素化依賴的降解調(diào)控。該過程的發(fā)生并不依賴于常見的自噬受體p62， 因p62缺失后，CCDC50依然可以促進(jìn)RLR的降解，但CCDC50可與p62協(xié)同作用。劉迎芳教授團(tuán)隊(duì)解析了CCDC50分子LIR結(jié)構(gòu)域和LC3復(fù)合體的晶體結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)分析證明CCDC50中存在一段非典型的LIR基序，該基序可以結(jié)合位于LC3的LDS結(jié)合位點(diǎn)，將K63泛素化修飾的RLR拉進(jìn)自噬小體。有趣的是，緊鄰LIR基序，CCDC50有一段MIU基序，該基序可稱為反向UIM基序，體外生化實(shí)驗(yàn)證實(shí)CCDC50-MIU可以結(jié)合在LC3的UDS位點(diǎn)，進(jìn)而證明CCDC50是一種新型自噬貨物受體，可以以兩段不同的疏水基序結(jié)合在LC3的不同位點(diǎn)。這類自噬貨物受體是首次在生物體內(nèi)被發(fā)現(xiàn)

納米囊泡的水腔包裹STING激活劑，表層通過MMP-2敏感的短肽PLGVRG偶聯(lián)抗PD-L1抗體。同時，通過酸敏感的酰胺鍵偶聯(lián)PEG，可阻礙抗PD-L1抗體與PD-L1陽性的正常組織結(jié)合，從而賦予了納米藥物的隱身性能。

中試階段/n該項(xiàng)目公開了一種能識別甲睪酮的特異性單克隆抗體,它是由保藏號為CCTCCNO:C201493的雜交瘤細(xì)胞株MT9C10所分泌的。本發(fā)明還公開了一種檢測甲睪酮的酶聯(lián)免疫方法和試劑盒。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明制備的單克隆抗體可以識別甲睪酮，識別靈敏度高，特異性好，本發(fā)明的ELISA方法和試劑盒檢測靈敏度、準(zhǔn)確度高，精密度好。

排異反應(yīng)是異體組織進(jìn)入有免疫活性宿主的不可避免的難題。一般在人體器官移植手術(shù)后，病人的免疫系統(tǒng)會很快識別出外來的新器官，并對新器官有強(qiáng)烈的排斥作用，這種排異現(xiàn)象是導(dǎo)致器官移植手術(shù)徹底失敗的主要原因之一，嚴(yán)重時會使病人不喪失生命。為解決器官移植的排異問題，出現(xiàn)了免疫抑制劑的概念。目前臨床常用的免疫抑制劑有環(huán)孢素 A（CsA）、他克莫司（tacrolimus, FK506）、雷帕霉素（Rapamycin，簡稱 RAPA）等，但這幾種都有較大的副作用，所以尋求在臨床上高活性、低毒的新型免疫抑制劑很有必要。

中試階段/n該項(xiàng)目屬于檢測分析和免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，與現(xiàn)有技術(shù)相比，該項(xiàng)目制備的單克隆抗體能夠特異性識別萊克多巴胺，酶聯(lián)免疫方法及試劑盒能檢測更低濃度的萊克多巴胺殘留，檢測靈敏度、準(zhǔn)確度高，精密度好。

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體的說是一種許氏平鮋免疫增強(qiáng)蛋白(HMGB1)編碼基因及其重組蛋白制備和應(yīng)用。HMGB?1為序列表SEQ?ID?No.1中的氨基酸序列所示，該蛋白的編碼基因?yàn)樾蛄斜鞸EQ?ID?No.2中的堿基序列所示。其制備方法：以鰻弧菌刺激的許氏平鮋頭腎cDNA為模板，PCR擴(kuò)增HMGB1編碼基因，構(gòu)建質(zhì)粒pHMGB1；將pHMGB1轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21Transetta(DE3)，對轉(zhuǎn)化子進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)后，提取和純化蛋白，即得重組HMGB1蛋白。所述重組HMGB1蛋白可結(jié)合雙鏈DNA，并可顯著提高許氏平鮋頭腎巨噬細(xì)胞的免疫活性，提高其對鰻弧菌的殺菌功能和許氏平鮋對鰻弧菌的抵抗能力。該重組HMGB1蛋白可作為免疫增強(qiáng)劑應(yīng)用于魚類鰻弧菌病害的防治。

本發(fā)明涉及一種基于免疫遺傳算法的模塊化多電平變換器的調(diào)制方法，對模塊化多電平變換器的優(yōu)化控 制方面的問題進(jìn)行研究，優(yōu)化目標(biāo)為模塊化多電平變換器的輸出電流波形最優(yōu)，本發(fā)明結(jié)合模塊化多電平變 換器的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和輸出特性，采用各相上橋臂投入子模塊的數(shù)目表示工作狀態(tài)，對模塊化多電平的工作狀態(tài) 進(jìn)行優(yōu)化，通過編碼操作，注入疫苗，親和度計算，濃度計算，免疫選擇，交叉操作，變異操作，倒位操作， 經(jīng)過多次迭代收斂后得到優(yōu)化后的模塊化多電平變換器的輸出電壓階梯波。

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤。據(jù)2020年全球癌癥統(tǒng)計，胃癌的發(fā)病率和死亡率已分別居惡性腫瘤的第5位和第4位，給社會造成了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。目前胃癌的治療包括外科手術(shù)結(jié)合放療、化療或靶向藥物治療。雖然患者的預(yù)后在逐漸改善，但結(jié)果仍不盡如人意。因此，深入探討影響胃癌治療和預(yù)后的因素，制定新的臨床治療策略是改善胃癌患者預(yù)后的首要任務(wù)。近年來，研究人員對腫瘤與TME之間的關(guān)系有了更深入的了解。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞可以通過過度表達(dá)PD-L1蛋白和分泌白細(xì)胞介素抑制劑來誘導(dǎo)免疫逃逸。此外，腫瘤相關(guān)的成纖維細(xì)胞包圍腫瘤細(xì)胞，抑制免疫細(xì)胞浸潤和藥物滲透，導(dǎo)致治療失敗。研究發(fā)現(xiàn)，TME細(xì)胞的富集水平可以用來評估胃癌的預(yù)后。因此，分析TME的異質(zhì)性，對于確定TME的定量指標(biāo)，指導(dǎo)胃癌的治療策略和預(yù)后評估，可能是提高療效和預(yù)后的關(guān)鍵。 組蛋白脫乙酰酶(HDACs)是一類共18種類型(HDCA1-11、SIRT1-7)的蛋白酶，研究表明，HDAC通過可逆地調(diào)節(jié)組蛋白和非組蛋白的乙酰化狀態(tài)，在TME的發(fā)展中起著關(guān)鍵作用。此外，研究發(fā)現(xiàn)，HDAC6參與了免疫系統(tǒng)中幾個關(guān)鍵因子的上調(diào)。然而，不同類型的HDAC在調(diào)節(jié)TME細(xì)胞浸潤水平方面存在異質(zhì)性，單個分子或一類分子靶向抑制劑很難精確控制TME的變化。因此，迫切需要系統(tǒng)分析HDACs的表達(dá)譜和相應(yīng)的TME特征，為胃癌的臨床治療策略和預(yù)后評估提供理論依據(jù)。 本發(fā)明提供了利用多組學(xué)方法研究HDACs在胃癌中的作用。分析了胃癌細(xì)胞系/患者的RNA-SEQ數(shù)據(jù)，并研究了HDAC表達(dá)與TME中免疫細(xì)胞浸潤的關(guān)系。通過本發(fā)明的研究確定了胃癌準(zhǔn)確預(yù)后的新靶點(diǎn)，有助于開發(fā)有效的治療策略。本發(fā)明篩選獲得與胃癌預(yù)后相關(guān)的103個基因，基于PCA方法構(gòu)建了HDS評分，分析結(jié)果證明：高HDS組比低HDS組胃癌患者有更長的生存時間；高HDS的胃癌患者更適合使用免疫治療；II期低HDS胃癌患者比高HDS胃癌患者從術(shù)后化療中獲益更多。 本發(fā)明的HDS評價體系為預(yù)測胃癌預(yù)后、選擇術(shù)后輔助化療方案和免疫治療方案提供了一種新的方法，在臨床上具有良好的應(yīng)用前景。

中試階段/n該技術(shù)研制了一種能識別多種卡巴氧和喹賽多代謝產(chǎn)物的特異性單克隆抗體和一種用于檢測卡巴氧和喹賽多代謝產(chǎn)物的酶聯(lián)免疫方法及試劑盒。與現(xiàn)有技術(shù)相比，該成果制備的單克隆抗體可以同時識別脫二氧卡巴氧、脫二氧喹賽多和 N4-脫一氧喹賽多，而且具有較高的靈敏度和特異性。建立的 ELISA 技術(shù)和試劑盒能同時檢測卡巴氧和喹賽多代謝產(chǎn)物在肉類食物中的殘留，具有檢測效率和靈敏度高，精密度和準(zhǔn)確度好等優(yōu)點(diǎn)。現(xiàn)已發(fā)展了多種用于檢測該類藥物殘留技術(shù)，在這些殘留分析技術(shù)中，由于其所需儀器昂貴、操作復(fù)雜