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本發(fā)明涉及一種綠盲蝽唾液酶中果膠酶與淀粉酶的體外提取測(cè)定方法，利用Paraflim膜，采取膜夾營(yíng)養(yǎng)法提取綠盲蝽唾液酶，并測(cè)定綠盲蝽中果膠酶、淀粉酶活性，Paraflim膜法提取綠盲蝽唾液酶利用Paraflim膜、膠卷盒、紗布、橡皮筋、位于兩層Paraflim膜間的液體營(yíng)養(yǎng)介質(zhì)，利用酶與底物反應(yīng)的原理，測(cè)定綠盲蝽唾液中果膠酶、淀粉酶活性。本方法材料易得，操作簡(jiǎn)單方便，制作成本低，占空間小，可實(shí)現(xiàn)綠盲蝽唾液酶的大量、批量提取，并且綠盲蝽可繼續(xù)回收利用。

懸賞金額：10萬(wàn)元 發(fā)榜企業(yè)：深圳市一正科技有限公司 支柱產(chǎn)業(yè)集群：生物醫(yī)藥與健康產(chǎn)業(yè)集群 需求領(lǐng)域：生物工程與檢測(cè)技術(shù)；輕工和化工生物技術(shù)；生物催化與發(fā)酵；智能制造裝備 技術(shù)關(guān)鍵詞：連續(xù)流酶催化；酶固定床；酶循環(huán)壽命；酯化反應(yīng)或酰化反應(yīng)

【發(fā) 明 人】陳軍；蔡寶昌；程冬【技術(shù)領(lǐng)域】本發(fā)明涉及藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種可以調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂及其在藥物制劑中的應(yīng)用。【摘要】 本發(fā)明公開了一種可以調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂及其應(yīng)用，該脂質(zhì)體復(fù)合磷脂由1~10份摩爾份數(shù)的二棕櫚酰磷酸膽堿和1~10份摩爾份數(shù)的氫化大豆磷脂制成，該脂質(zhì)體復(fù)合磷脂可以用于制備熱敏靶向脂質(zhì)體制劑，本發(fā)明通過大量實(shí)驗(yàn)篩選不同的磷脂材料，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明二棕櫚酰磷酸膽堿和氫化大豆磷脂科學(xué)組合后得到能靈活調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂，該復(fù)合磷脂制備成脂質(zhì)體膜時(shí)能夠形成新相，不存在相分離，具有單一的相變溫度，能夠克服現(xiàn)有技術(shù)兩種不同磷脂材料存在二種相變溫度的缺點(diǎn)；且與單一DPPC材料脂質(zhì)體相比具有更好的穩(wěn)定性和靶向釋藥效果，與單一HSPC材料脂質(zhì)體相比具有人體耐受性更好的相變溫度，應(yīng)用范圍廣泛。

桑色素是黃酮類化合物中的一種，是從黃桑木、桑橙樹等桑科植物的樹皮和許多中草藥中提取的一種淺黃色色素，化學(xué)名為3, 5, 7, 2′, 4′-五羥基去氫黃酮。研究表明，桑色素具有抗癌、抗炎、抗氧化等廣泛的藥理作用，臨床上可用于抗病毒感染，治療頭痛、冠心病、慢性炎癥及癌癥的治療，與其他化療藥物聯(lián)用能提高療效，減少副作用，還有文獻(xiàn)報(bào)道桑色素具有明顯降低體內(nèi)尿酸水平的作用，可用于治療痛風(fēng)。 桑色素廣泛顯著的生物學(xué)效應(yīng)使其具有重要的研究?jī)r(jià)值，但其水溶性、脂溶性均較差，難以注射給藥，且口服生物利用度極低，影響了桑色素本身的藥效，也限制了它在臨床中的應(yīng)用，目前還沒有制劑上市。 桑色素的口服生物利用度低的原因較多，除了脂溶性和水溶性差之外，桑色素還能被胃腸道表面的P糖蛋白外排；另外，桑色素在5、7、4′三個(gè)位點(diǎn)均有羥基，所以在體內(nèi)清除很快。 針對(duì)上述原因和桑色素為黃酮類化合物的特點(diǎn)，我們?cè)O(shè)想將桑色素和磷脂在特定條件下形成桑色素-磷脂復(fù)合物，利用復(fù)合物的性質(zhì)來(lái)促進(jìn)藥物在胃腸道的吸收，而且磷脂還可以通過與桑色素結(jié)構(gòu)上的羥基發(fā)生相互作用，從而降低桑色素的體內(nèi)清除速率。兩者有可能顯著提高桑色素的生物利用度。 目前，我們已經(jīng)完成了桑色素-磷脂復(fù)合物的制備工藝條件的篩選，并將其制備成口服自乳化給藥系統(tǒng)。在大鼠口服給藥后測(cè)定其藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，結(jié)果表明桑色素原料、桑色素-磷脂復(fù)合物及其自乳化給藥系統(tǒng)的藥時(shí)曲線下面積（AUC）分別為638.9、3045.9、4310.0 mg/l min，后兩者口服生物利用度分別是原料藥的4.77倍和6.75倍，可見顯著提高了桑色素的口服生物利用度，證明了我們的設(shè)想。 目前，桑色素-磷脂復(fù)合物口服自乳化給藥系統(tǒng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究、藥效學(xué)研究、安全性評(píng)價(jià)等臨床前研究?jī)?nèi)容正在按計(jì)劃進(jìn)行。

該液體酶穩(wěn)定劑通用性強(qiáng)，適用于多種酶制劑，并且通用于未經(jīng)濃縮的酶液、中空纖維超濾濃縮或膜式超濾濃縮的酶液，都可在室溫保存三個(gè)月至八個(gè)月，剩余酶活力在80%。具體技術(shù)指標(biāo)為：1．未經(jīng)濃縮的液體α-淀粉酶，室溫保存9個(gè)月，剩余酶活力達(dá)80%以上。/line2．中空纖維超濾濃縮的液體α-淀粉酶，室溫保存6個(gè)月，剩余酶活力達(dá)80%以上。/line3．膜式超濾的液體堿性蛋白酶，室溫保存8個(gè)月，剩余酶活力在80%左右。/line4．未經(jīng)濃縮的液體糖化酶，室溫保存5個(gè)月，剩余酶活力接近90%。/line5．經(jīng)中空纖維超濾濃縮的液體糖化酶，室溫保存3個(gè)半月，剩余酶活力接近90%。未經(jīng)濃縮和膜式超濾的酶液添加穩(wěn)定劑后的液體酶穩(wěn)定性明顯好于經(jīng)中空纖維超濾濃縮的液體酶。因此膜式超濾較好。實(shí)驗(yàn)證明，液體酶添加劑能提高酶的抗變性能力，促進(jìn)變性酶的復(fù)性；不同添加劑之間有協(xié)同或拮抗作用，對(duì)穩(wěn)定劑配方的篩選提供了理論依據(jù)。/line所用的添加劑價(jià)格低廉，來(lái)源方便，并具有通用性。主要設(shè)備是超濾濃縮裝置及包裝容器。廠房面積約200平方米。可通過技術(shù)轉(zhuǎn)讓或技術(shù)入股方式進(jìn)行合作。

可以量產(chǎn)/n針對(duì)當(dāng)前工業(yè)發(fā)展對(duì)脂肪酶的大量需求與脂肪酶實(shí)際表達(dá)水平較低 的技術(shù)瓶頸，突破了脂肪酶超高效表達(dá)技術(shù)關(guān)鍵，構(gòu)建的白地霉脂肪酶 基因工程菌 10L 發(fā)酵酶活力可達(dá) 11,200 U/ml 以上，目前國(guó)際報(bào)道的白 地霉脂肪酶表達(dá)酶活力約 200U/ml，可見本技術(shù)之精湛。產(chǎn)品可以用于生 物柴油制備，不飽和脂肪酸富集，油脂水解、轉(zhuǎn)酯、酯化，食品加工、 烘焙等廣泛用途。建設(shè)其發(fā)酵生產(chǎn)線預(yù)計(jì)需要 800-1000 萬(wàn)元，經(jīng)濟(jì)效益 可觀。

成果簡(jiǎn)介： 本研究提供了一種基于ATP再生系統(tǒng)和雙功能谷胱甘肽合成酶（GshF）的酶法制備谷胱甘肽的方法。在谷胱甘肽合成過程中，經(jīng)典的酶法是由谷氨酰半胱氨酸合成酶和谷胱甘肽合成酶兩步催化完成的。而 GshF可一步催化谷胱甘肽合成，簡(jiǎn)化的反應(yīng)步驟，且該酶反饋抑制作用小，非常適合應(yīng)用于酶法合成谷胱甘肽。酶法合成谷胱甘肽需要大量消耗ATP，通過引入高

本發(fā)明涉及一種綠盲蝽唾液酶中蛋白酶與纖維素酶的體外提取測(cè)定方法，利用Paraflim膜，采取膜夾營(yíng)養(yǎng)法提取綠盲蝽唾液酶，并測(cè)定綠盲蝽中蛋白酶與纖維素酶的活性，Paraflim膜法提取綠盲蝽唾液酶利用Paraflim膜、膠卷盒、紗布、橡皮筋、位于兩層Paraflim膜間的液體營(yíng)養(yǎng)介質(zhì)，利用酶與底物反應(yīng)的原理，測(cè)定綠盲蝽唾液中蛋白酶、纖維素酶的活性。本方法材料易得，操作簡(jiǎn)單方便，制作成本低，占空間小，可實(shí)現(xiàn)綠盲蝽唾液酶的大量、批量提取，并且綠盲蝽可繼續(xù)回收利用。