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本發明公開了一種魚類NKEF-A重組蛋白對適應性體液免疫的活化效應及其應用，所述的應用為用于制備能夠促進魚類體液免疫能力的免疫增強劑，所述魚類NKEF-A重組蛋白的氨基酸序列為SEQID?NO:1所示；本發明提供的NKEF-A重組蛋白作為適應性體液免疫增強劑，其優點在于：(1)使用劑量小，效率高；以1:100(NKEF-A蛋白:抗原)的NKEF-A重組蛋白劑量即可發揮顯著的免疫促進作用；(2)易于制備免疫混合液：NKEF-A重組蛋白是可溶性蛋白，容易與抗原混合，克服了傳統礦物油乳劑類制劑不易乳化抗原的缺點；(3)安全性高；與細菌毒素或化合物制劑不同，NKEF-A是宿主自身的蛋白，不存在外源物質導入產生的潛在毒副作用。

本發明涉及互聯網技術，公開了一種郵件行為特征庫生成方法、垃圾郵件判斷方法、垃圾郵件特征庫更新方法。本發明實施采用分類已知的垃圾郵件的行為特征庫生成方法，并使用生成的特征對分類未知的郵件進行判斷。

中試階段/n該成果公開了一種用于增強免疫力的石金錢龜提取物，它是將石金錢龜的龜肉和龜甲分別用水和乙醇進行提取，龜肉提取液和龜甲提取液分別濃縮、干燥后，按0.5-3∶1的比例混合制成的。本發明還公開了該提取物的制備方法和含有該提取物的制劑，以及該制劑的制備方法。所制得的石金錢龜提取物具有顯著的增強免疫力的作用，由該提取物制得的膠囊劑含藥量大，性質穩定，在正常室溫條件下可貯存兩年，不吸潮，不變質，口感好，服藥順應性佳，患者在服藥時和服藥后不會感覺到難受的腥味。

 納米表面結構引導骨再生是當前骨替代修復材料領域一個新的研究方向及研究熱點。目前的研究主要集中在納米表面結構對成骨細胞系成骨分化的調控機制，而對成骨微環境中免疫細胞的調控作用研究甚少。本研究系統比較了巨噬細胞對不同納米顆粒大小（16，38，68 nm）和不同表面化學成分（富含胺基的丙烯胺及富含羧基的丙烯酸）的納米表面結構生物材料的免疫應答差異，發現納米表面結構可以改變巨噬細胞的形態，將胞外的理化信號轉入胞內，激活自噬反應，從而調控免疫微環境，影響間充質干細胞的成骨分化。      該研究從骨形成免疫微環境的角度提出了“納米表面引導成骨”的新機制，提示通過精準控制生物材料的納米表面結構，可靶向調控免疫細胞，營造有利于骨形成的免疫微環境，最終實現納米成骨，為納米骨生物材料的研發提供了新的策略。

研發階段/n一種豬藍耳病基因重組豬霍亂沙門氏菌疫苗及應用。　　成果簡介：沙門氏菌是一種胞內寄生的革蘭氏陰性腸道桿菌，具有侵襲性。減毒沙門氏菌為載體的基因工程疫苗具有無法比擬的優越性，口服該種基因工程疫苗可以在激發產生抗沙門氏菌免疫應答的同時誘發特異性針對外源蛋白的體液和細胞免疫。豬藍耳病是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種以妊娠母豬繁殖障礙以及仔豬呼吸道疾病的高度接觸傳染病，可對豬場造成巨大的損失。本發明涉及一種豬藍耳病基因重組豬霍亂沙門氏菌疫苗及應用，屬于動物細菌基因工程技術領域，具

01. 成果簡介 中東呼吸綜合征冠狀病毒（MERS-CoV）是2012年在中東地區首先發現的一種新型冠狀病毒，與嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒（SARS-CoV）同屬于β冠狀病毒，能夠引發嚴重的人類呼吸系統疾病。據世界衛生組織的最新統計表明，MERS-CoV已造成全球27個國家2428例感染，致死率高達35%。 MERS-CoV表面刺突蛋白（Spike）蛋白是病毒顆粒與細胞受體二肽基肽酶4（DPP4）作用的關鍵蛋白，也是MERS-CoV疫苗與保護性單克隆抗體研究的熱門靶點。本項目團隊在靶向刺突蛋白的高活性中和抗體篩選、鑒定、分子結構研究中取得了一系列突破。本團隊在國際上首批報道了兩株人源MERS-CoV中和抗體MERS-4與MERS-27，它們均能高效抑制假病毒與活病毒對體外培養細胞的侵染，在動物模型中也顯示了很好的保護作用。該團隊還綜合運用結構生物學、生物化學以及病毒學研究方法闡明了這兩株抗體識別Spike受體結合結構域（RBD）的不同位點，并阻斷Spike與受體DPP4的結合。 本項目團隊還利用一種稀有黑猩猩腺病毒AdC68為載體，搭載MERS-CoV表面全長的Spike蛋白，在轉基因小鼠（hDPP4-KI）模型中，一次滴鼻免疫即可誘導產生長期保護性免疫反應，并完全預防小鼠感染或降低感染后的疾病進展速度。解決了目前研發的MERS-CoV疫苗大多需要進行多次免疫注射的復雜程序問題。進一步的抗體分析表明，免疫動物血清中含有廣譜高滴度針對RBD的多克隆和單克隆中和抗體，能夠有效阻斷病毒與受體DPP4的結合，從而解析了其長期保護性免疫反應的分子基礎和機制，為疫苗下一階段進入大動物模型和人體臨床試驗做好了準備。                        MERS-CoV及其相關中和抗體和疫苗研究時間軸AdC68-S重組疫苗在hDPP4-KI轉基因小鼠模型上的保護效果02. 應用前景 本項成果可應用于治療或預防中東呼吸綜合征冠狀病毒的抗體藥物及疫苗候選物。03. 知識產權 本項成果已申請4項發明專利，其中3項已授權。04. 團隊介紹 本項目團隊由生命學院實驗室與醫學院實驗室聯合組成，兩位實驗室負責人分別為清華大學生命學院和醫學院教授、博士生導師，主要研究方向分別為結構生物學與病毒學，已發表國內外高水平學術論文數十篇，聯合申請專利4項。05.合作方式 技術許可。06.聯系方式 郵箱：zhangxinrui@tsinghua.edu.cn

本發明公開了一種檢測TNF?α的光電免疫傳感器及其制備方法和應用，光基底電極表面依次經GO?PTC?NH2溶液、anti?TNF?α溶液修飾，所述基底電極為玻碳電極或氧化銦錫半導體電極。本發明利用GO?PTC?NH2納米復合物制備光電免疫生物傳感器用于腫瘤標志物檢測的方法，與傳統的酶聯免疫吸附以及PCR等方法相比具有操作簡便、技術要求低、反應迅速的特點，所使用的光電探針摒棄了傳統金屬材料等的光腐蝕等弊端，穩定性較好且負載量大，功能化基團多，便于修飾。

研發階段/n本成果合成了人工免疫原和包被原，制備出高效價的特異性抗體，建立了肌肉(豬、雞、魚)、肝臟(豬、雞)、腎臟(豬)中AOZ殘留檢測的ELISA方法，并與建立的多殘留檢測HPLC方法進行了對比。該方法的檢測限、回收率、變異系數均達到我國獸藥殘留快速檢測的要求。以上述方法為基礎，在國內首次研制出動物樣品中AOZ殘留檢測ELISA試劑盒。通過與國外同類試劑盒、HPLC法的比對和動物殘留試驗證明，該試劑盒的靈敏度、準確度和重現性與國外試劑盒水平相當。經多家檢測機構和研究單位的復核和應用表明，該試劑盒

該研究發現RNA病毒感染宿主細胞可誘導表達一種新型自噬受體CCDC50，該自噬受體通過識別K63型泛素化修飾的RNA病毒模式識別受體RIG-I/MDA5（RLR）并介導后者的自噬途徑依賴的降解，從而抑制病毒感染誘導的I型干擾素的產生，幫助機體恢復到靜息狀態，避免過度免疫反應造成的組織損傷和自身炎癥。我校博士后侯盼盼為論文第一作者，郭德銀教授為通訊作者，我校醫學院、附屬第七醫院為第一作者單位。       天然免疫是一種非特異性的宿主抵抗病原微生物入侵的免疫反應,它廣泛存在于機體的絕大部分細胞，被認為是機體抵抗病原體感染的第一道防線。隨著近幾十年的研究，人們對天然免疫系統愈發了解，已經發現并鑒定出天然免疫反應的關鍵調控因子和信號轉導因子，然而某些重要調控因子的結構和功能機制依然不清楚，且這些調控因子的生理和病理作用尚有待于研究。郭德銀教授課題組利用CRISPR/Cas9第二代文庫在免疫細胞中進行了全基因組水平的大規模無偏差篩選，發現了一系列參與天然免疫反應調控的新型基因。進一步的驗證過程中發現CCDC50蛋白在RNA病毒感染下表達量顯著增加且其表達模式和RLR的表達模式一致，提示著CCDC50可能參與調控RLR介導的信號通路活性。為了進一步驗證該觀察結果，該課題組構建了CCDC50條件缺失的小鼠模型，攻毒實驗結果證明缺失CCDC50后，病毒感染條件下，I型干擾素表達上調，其下游的ISGs表達水平也隨之升高，小鼠清除病毒能力增強，肺部組織損傷和炎性浸潤減少，且小鼠存活率增加，從而證明CCDC50在機體水平具有生理學功能。       進一步的機制探究中，該課題組發現CCDC50特異性識別K63泛素化修飾的RLR，并促進激活的RLR的自噬途徑依賴的降解，此機制不同于以往了解較多的K48泛素化依賴的降解調控。該過程的發生并不依賴于常見的自噬受體p62， 因p62缺失后，CCDC50依然可以促進RLR的降解，但CCDC50可與p62協同作用。劉迎芳教授團隊解析了CCDC50分子LIR結構域和LC3復合體的晶體結構，結構分析證明CCDC50中存在一段非典型的LIR基序，該基序可以結合位于LC3的LDS結合位點，將K63泛素化修飾的RLR拉進自噬小體。有趣的是，緊鄰LIR基序，CCDC50有一段MIU基序，該基序可稱為反向UIM基序，體外生化實驗證實CCDC50-MIU可以結合在LC3的UDS位點，進而證明CCDC50是一種新型自噬貨物受體，可以以兩段不同的疏水基序結合在LC3的不同位點。這類自噬貨物受體是首次在生物體內被發現

納米囊泡的水腔包裹STING激活劑，表層通過MMP-2敏感的短肽PLGVRG偶聯抗PD-L1抗體。同時，通過酸敏感的酰胺鍵偶聯PEG，可阻礙抗PD-L1抗體與PD-L1陽性的正常組織結合，從而賦予了納米藥物的隱身性能。