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研發(fā)階段/n內(nèi)容簡(jiǎn)介：口服溶栓酶腸溶片主要用于心腦血管由于血栓引起的疾病治療，例如腦血栓、心肌梗死、肺血栓等疾病。供醫(yī)藥生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)。技術(shù)原理：豆豉溶栓酶能直接降解血塊中的纖維蛋白，溶解血栓，使血管再通。利用微生物發(fā)酵產(chǎn)酶，經(jīng)分離純化（鹽析、超濾、干燥），獲得酶活和純度高的溶栓酶，再經(jīng)制片，包腸溶衣膜，使片劑中的溶栓酶不被胃液中的胃蛋白酶破壞，而在腸中溶解吸收。該項(xiàng)目成果鑒定為國(guó)內(nèi)領(lǐng)先水平。技術(shù)指標(biāo)：1.溶栓酶干粉的酶活達(dá)139U/kg(尿激酶單位)；2.腸溶片酶活達(dá)11125U/片(尿激酶單位)；

【發(fā) 明 人】郭立瑋；付廷明；田曉然；劉峰；張偉【摘要】本發(fā)明提供一種具有溶栓活性的全蝎提取物，涉及中藥分離領(lǐng)域。所述具有溶栓活性的全蝎提取物，為分子量在1000-1500Da的小分子肽的混合物，采用如下方法制備：(1)將全蝎藥材用溶劑浸泡，粉碎后，離心取上清液；將所述上清液超濾，取截留液采用硫酸銨沉淀法得到粗蛋白；(2)將步驟(1)得到的粗蛋白采用酶水解得到酶解液；(3)將步驟(2)所述酶解液透過(guò)液依次經(jīng)過(guò)陰離子交換層析、凝膠過(guò)濾層析和反相高效液相層析，取具有酰胺水解活性的洗脫液即得具有溶栓活性的全蝎提取物。本發(fā)明具有溶栓活性的全蝎提取物，具有較強(qiáng)的纖溶活性和抗凝血活性，去除了全蝎中大量的雜蛋白，活性成分的回收率高，純化倍數(shù)高。

中試階段/n人體血管總長(zhǎng)約9.6萬(wàn)千米，可繞赤道2.7圈。在人類(lèi)所有的疾病中，因血液循環(huán)不暢造成的疾病占67%，我國(guó)每年約有700萬(wàn)人死于心腦血管相關(guān)疾病，患病總?cè)藬?shù)超過(guò)3億，2015年全球心腦血管疾病相關(guān)市場(chǎng)超過(guò)1萬(wàn)億美元。心腦血管疾病屬社會(huì)重大疾病，嚴(yán)重危害國(guó)民健康，QK纖溶酶的產(chǎn)業(yè)化對(duì)于心腦血管疾病的預(yù)防和治療具有重大的社會(huì)意義，同時(shí)具有巨大的市場(chǎng)應(yīng)用前景和價(jià)值。新一代溶栓蛋白酶枯草桿菌QK纖溶酶從上千株菌株中篩選得到枯草芽孢桿菌Subtilisin-QK，發(fā)酵產(chǎn)生

成果創(chuàng)新點(diǎn) 顆粒溶解素（granulysin, GNLY）是一種存在于人體 細(xì)胞毒 T 淋巴細(xì)胞（cytotoxic T lymphocytes, CTLs）。 項(xiàng)目組首次發(fā)現(xiàn) GNLY 在體外可顯著增加耐藥金黃色葡 萄球菌 MRSA 對(duì)氨芐西林和頭孢菌素的敏感性；對(duì)氨芐西林 抗銅綠假單胞桿菌也有抗菌增敏作用。而且，GNLY 具有良 好的安全性和低免疫原性，是一種理想的富有開(kāi)發(fā)前景的 候選抗生素增效劑。

顆粒溶解素（granulysin, GNLY）是一種存在于人體細(xì)胞毒 T 淋巴細(xì)胞（cytotoxic T lymphocytes, CTLs）。 項(xiàng)目組首次發(fā)現(xiàn) GNLY 在體外可顯著增加耐藥金黃色葡萄球菌 MRSA 對(duì)氨芐西林和頭孢菌素的敏感性；對(duì)氨芐西林抗銅綠假單胞桿菌也有抗菌增敏作用。而且，GNLY 具有良好的安全性和低免疫原性，是一種理想的富有開(kāi)發(fā)前景的候選抗生素增效劑。 

生物大分子藥物是21世紀(jì)藥物研究開(kāi)發(fā)中最有前景的領(lǐng)域之一。運(yùn)用生物信息學(xué)和計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)方法開(kāi)展蛋白質(zhì)工程藥物的分子設(shè)計(jì)是當(dāng)今生物藥物的研究熱點(diǎn)?，F(xiàn)在生物大分子藥物已被全球公認(rèn)為21世紀(jì)藥物研究開(kāi)發(fā)中最具尖端性及前沿性的研究領(lǐng)域，世界上所開(kāi)展的所有最尖端、最先進(jìn)的重大疾病治療方法均與生物大分子藥物有關(guān)，近年來(lái)蛋白質(zhì)工程技術(shù)為藥物的研究提供的有效的技術(shù)平臺(tái)，加快了開(kāi)發(fā)理想蛋白質(zhì)工程藥物的進(jìn)程. 當(dāng)前心腦血管疾病已成為對(duì)人類(lèi)健康的最大威脅之一，研究開(kāi)發(fā)高效的溶栓藥已成為臨床的迫切要求，盡管現(xiàn)有的溶栓藥物療效肯定，但其中大多數(shù)藥物用藥劑量大,治療成本高, 還由于缺乏組織特異性和病變部位的靶向性，在體內(nèi)極易降解，半衰期短或難以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，并有潛在的出血性以及服藥后血栓再生等缺點(diǎn)，如何提高溶栓藥物的靶向性，使藥物選擇性地作用于血栓部位，以減少不良反應(yīng)，是當(dāng)前治療心血管疾病的一個(gè)亟待解決的問(wèn)題，運(yùn)用基因組、蛋白組研究的最新成果以及采用現(xiàn)代生物技術(shù)開(kāi)發(fā)新型高效靶向的溶血栓新藥具有創(chuàng)新的學(xué)術(shù)價(jià)值和重大的社會(huì)意義及顯著經(jīng)濟(jì)效益。近年來(lái)蛋白質(zhì)工程技術(shù)將溶栓藥物與抗凝劑等連接成既具溶栓活性,又具抗凝雙重功能融合蛋白是目前國(guó)內(nèi)外第三代溶栓藥物研究的方向，新型溶栓劑的要求是具有多種功能綜合在一起的理想的溶栓制劑,既具有較高的溶栓活性,又具抑制血栓的功能,從而使溶栓劑具有較高的纖維蛋白的專(zhuān)一性,降低溶栓藥物使用后再栓塞形成的可能性。采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)設(shè)計(jì)具有抗凝溶栓雙功能的新藥已經(jīng)成為現(xiàn)代藥學(xué)的研究重點(diǎn)。同時(shí)隨著基礎(chǔ)研究血栓形成機(jī)制的進(jìn)一步闡明,血栓疾病的發(fā)生非單一靶點(diǎn)引發(fā)而是一種多靶點(diǎn)疾病，針對(duì)血栓形成的特點(diǎn)和不同靶點(diǎn)進(jìn)行更有效的抗血栓形成的新藥研究是國(guó)內(nèi)外該領(lǐng)域的前沿。 本項(xiàng)目是一種具有成為新一代溶栓新藥的良好潛景的全新抗凝和溶栓雙重功效水蛭素12肽-瑞普替酶融合蛋白(HV12p-rPA) 。

所屬領(lǐng)域：生物技術(shù)與醫(yī)藥成果介紹：自主開(kāi)發(fā)溶析-鹽析復(fù)合結(jié)晶技術(shù)，尤其適用于熱敏性、生物活性、多羥基類(lèi)物質(zhì)的結(jié)晶專(zhuān)利情況：申請(qǐng)成熟度：量產(chǎn)創(chuàng)新要點(diǎn)：結(jié)晶過(guò)程無(wú)需外加熱量，節(jié)能降耗減排，操作條件溫和，可有效保護(hù)生物活性

項(xiàng)目簡(jiǎn)介 腦卒中為腦血管破裂或血栓阻塞血管導(dǎo)致大腦缺血損傷，其治療的藥物非常缺乏，阿替普酶是迄今為止唯一獲得FDA批準(zhǔn)用于缺血性腦卒中的溶栓藥物,易引起再灌注損傷,可延長(zhǎng)其給藥時(shí)間窗和減輕再灌注損傷。但臨床上神經(jīng)保護(hù)劑十分缺乏。本項(xiàng)目為腦中風(fēng)治療的小分子蛋白藥物研究，包括兩個(gè)小分子量蛋白。其一是犬鉤蟲(chóng)抗凝多肽5（AcAP5），是一種具有強(qiáng)效抗血栓形成（抑制FXa）和溶血栓（抑制TAFIa）兩種功能的蛋白，其中溶栓作用為本團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)（已申請(qǐng)專(zhuān)利并獲得授權(quán)）。其二是在AcAP5基礎(chǔ)上改造的蛋白TBN（已申請(qǐng)專(zhuān)利），具有溶栓和神經(jīng)保護(hù)作用功能。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明AcAP5和TBN均具有較好的溶栓（溶解動(dòng)脈血栓）、抗栓（預(yù)防腦中風(fēng)血栓溶解過(guò)程中血栓再形成）和神經(jīng)保護(hù)作用（減小梗死體積），“三位一體”的功能使其具有更好的治療腦卒中效果。項(xiàng)目團(tuán)隊(duì) 王銀葉，教授，在心血管領(lǐng)域特別是腦卒中新藥研究方面有20多年的經(jīng)驗(yàn)，發(fā)表了數(shù)十篇相關(guān)文章，主持過(guò)多項(xiàng)國(guó)家自然基金和科技部項(xiàng)目。項(xiàng)目骨干：朱元軍，博士，講師。擅長(zhǎng)蛋白質(zhì)/多肽的設(shè)計(jì)、表達(dá)和純化工藝研究。項(xiàng)目骨干：劉曉巖，博士，講師。擅長(zhǎng)腦卒中的疾病模型構(gòu)建，以及藥物的藥理活性評(píng)價(jià)及機(jī)制研究。以及碩士研究生4名。整個(gè)團(tuán)隊(duì)具有蛋白設(shè)計(jì)、表達(dá)、純化、分子機(jī)制和藥效學(xué)評(píng)價(jià)等技術(shù)能力和條件。 應(yīng)用范圍 AcAP5和TBN可用于急性缺血性腦卒中患者的治療。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明，我國(guó)每年腦卒中新發(fā)病例高達(dá)200余萬(wàn)，假設(shè)僅僅5%的病人（10萬(wàn)）接受10000元的AcAP5或TBN等蛋白治療，則年銷(xiāo)售額可望達(dá)到10億元。項(xiàng)目階段 本項(xiàng)目處于臨床前研究階段。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明AcAP5和TBN均具有較好的抗栓、溶栓和腦保護(hù)作用，150 nmol/kg給藥劑量下AcAP5和TBN均可顯著減少小鼠腦梗死的體積。

腦卒中為腦血管破裂或血栓阻塞血管導(dǎo)致大腦缺血損傷，其治療的藥物非常缺乏，阿替普酶是迄今為止唯一獲得FDA批準(zhǔn)用于缺血性腦卒中的溶栓藥物,易引起再灌注損傷,可延長(zhǎng)其給藥時(shí)間窗和減輕再灌注損傷。但臨床上神經(jīng)保護(hù)劑十分缺乏。本項(xiàng)目為腦中風(fēng)治療的小分子蛋白藥物研究，包括兩個(gè)小分子量蛋白。其一是犬鉤蟲(chóng)抗凝多肽5（AcAP5），是一種具有強(qiáng)效抗血栓形成（抑制FXa）和溶血栓（抑制TAFIa）兩種功能的蛋白，其中溶栓作用為本團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)（已申請(qǐng)專(zhuān)利并獲得授權(quán)）。 其二是在AcAP5基礎(chǔ)上改造的蛋白TBN（已申請(qǐng)專(zhuān)利），具有溶栓和神經(jīng)保護(hù)作用功能。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明AcAP5和TBN均具有較好的溶栓（溶解動(dòng)脈血栓）、抗栓（預(yù)防腦中風(fēng)血栓溶解過(guò)程中血栓再形成）和神經(jīng)保護(hù)作用（減小梗死體積），“三位一體”的功能使其具有更好的治療腦卒中效果。