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本發(fā)明公開(kāi)了一種蝶蛹金小蜂抗菌蛋白Pp-AP5編碼的核酸序列，所分離出的DNA分子包括：編碼具有蝶蛹金小蜂抗菌蛋白Pp-AP5活性的多肽核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ？ID？NO：1中從核苷酸第329-454位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者該核苷酸序列能在40-55℃條件下與SEQ？ID？NO：1中從核苷酸第329-454位的核苷酸序列雜交。本發(fā)明還同時(shí)公開(kāi)了一種蝶蛹金小蜂抗菌蛋白Pp-AP5，其具有SEQ？ID？NO：2所示的氨基酸序列。蝶蛹金小蜂抗菌蛋白Pp-AP5具有抗菌性能。

基因檢測(cè)在現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)中的作用越來(lái)越重要。基因檢測(cè)的第一步是從固定或未固定的生物樣品中提取核酸。傳統(tǒng)的化學(xué)方法，通常先用酶消化細(xì)胞或組織，再經(jīng)有機(jī)溶劑抽提，使被分離的核酸經(jīng)過(guò)酒精或異丙醇沉淀，收集并濃縮于水中。整個(gè)過(guò)程需2-3天。本項(xiàng)目提供了核酸提取新思路，以高壓液相一步法，取代傳統(tǒng)石蠟切片必須先脫蠟再酶消化的繁鎖、費(fèi)時(shí)步驟。完成石蠟切片脫蠟與酶消化整個(gè)過(guò)程僅20-30分鐘。

從研究核酸的高分子特性以及化學(xué)改性方法入手，成功研究出若干有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值的新型生物醫(yī)用核酸材料 癌癥的早期診斷和靶向性治療一直是最重要的科學(xué)問(wèn)題之一。近年來(lái)，生物相容、能

基因檢測(cè)在現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)中的作用越來(lái)越重要。基因檢測(cè)的第一步是從固定或未固定的生物樣品中提取核酸。傳統(tǒng)的化學(xué)方法，通常先用酶消化細(xì)胞或組織，再經(jīng)有機(jī)溶劑抽提，使被分離的核酸經(jīng)過(guò)酒精或異丙醇沉淀，收集并濃縮于水中。整個(gè)過(guò)程需2-3天。本項(xiàng)目提供了核酸提取新思路，以高壓液相一步法，取代傳統(tǒng)石蠟切片必須先脫蠟再酶消化的繁鎖、費(fèi)時(shí)步驟。完成石蠟切片脫蠟與酶消化整個(gè)過(guò)程僅20-30分鐘。

深圳國(guó)際研究生院彌勝利副研究員團(tuán)隊(duì)與深圳市華邁生物醫(yī)療科技有限公司合作，在前期微流控芯片工作成果的基礎(chǔ)上快速響應(yīng)，積極申報(bào)新型冠狀病毒感染應(yīng)急防治專項(xiàng)，開(kāi)展基于微流控芯片技術(shù)的便攜式核酸快檢系統(tǒng)研究的科研攻關(guān)任務(wù)，致力于研發(fā)并建立一種低消耗、低成本、高通量、自動(dòng)化操作的微流控芯片及其檢測(cè)方法。 該微流控芯片技術(shù)可以大大縮短確診時(shí)間，減少人力的投入，以便于醫(yī)護(hù)人員更加有序和高效地開(kāi)展防控工作；同時(shí)，該技術(shù)還可作為核酸檢測(cè)的通用技術(shù)，在未來(lái)廣泛地應(yīng)用于多種疾病的檢測(cè)和預(yù)防。目前，樣機(jī)的主要模塊已搭建完成，后期將完成軟硬件聯(lián)調(diào)，準(zhǔn)備申請(qǐng)醫(yī)療注冊(cè)證。

本成果基于高效微流體芯片、“電子掩膜”（PLC，F(xiàn)PGA和LabVIEW構(gòu)建）與光掩模相結(jié)合及高性能手性miniPEG-γPNA探針搭建診斷型肽核酸芯片制備平臺(tái)。 設(shè)計(jì)并應(yīng)用了高效單體活化裝置；“電子掩膜”可降低芯片制備成本，光掩模技術(shù)實(shí)現(xiàn)對(duì)芯片密度的調(diào)整；自行制備了miniPEG-γPNA單體，并應(yīng)用到微流體芯片上；手性探針通過(guò)miniPEG修飾提高水溶性，可預(yù)組織成右手螺旋結(jié)構(gòu)，與DNA雜交結(jié)合特異性更好，穩(wěn)定性更高，能識(shí)別入侵混合序列雙鏈DNA(dsDNA)，實(shí)現(xiàn)對(duì)靶標(biāo)的直接檢測(cè)。 基于微流體混合器的光導(dǎo)向原位合成系統(tǒng)設(shè)計(jì)示意圖和實(shí)物圖

01.成果簡(jiǎn)介 地中海貧血癥，又稱珠蛋白生成障礙性貧血癥，是一組遺傳性溶血性貧血疾病，由血紅蛋白中一種或一種以上珠蛋白鏈的缺失或不足導(dǎo)致。珠蛋白鏈包括：γ、δ、ε和β珠蛋白基因組成“β基因族”，ζ和α珠蛋白組成“α基因族”，相應(yīng)的，地中海貧血癥分為α型、β型、δβ型和δ型4種，其中以β地中海貧血癥和α地中海貧血癥較為常見(jiàn)。 地中海貧血癥的常規(guī)治療方法包括：一般性治療、紅細(xì)胞輸注、鐵螯合劑去鐵治療、脾切除、造血干細(xì)胞移植、基因活化治療等，其中，輸血治療和去鐵治療是目前最重要的兩種治療方法。然而，供體缺乏、排異反應(yīng)、藥物副反應(yīng)等因素影響了上述方法的應(yīng)用。 本項(xiàng)成果利用歸巢內(nèi)切酶I-SceI的特異性低毒性以及TALE的特異性DNA識(shí)別域，依據(jù)β地中海貧血癥的β-珠蛋白基因序列，首先改造I-SceI和TALE，使其分別可以特異性識(shí)別14bp和18bp的β珠蛋白DNA序列，然后使二者融合，從而構(gòu)建出可以識(shí)別β珠蛋白32bp DNA序列的融合型內(nèi)切酶TALE-I SceI，并利用β-地中海貧血疾病患者造血干細(xì)胞為模型，對(duì)其突變基因進(jìn)行修復(fù)，驗(yàn)證了本項(xiàng)成果的安全性和實(shí)用性。 圖1 融合型內(nèi)切酶TALE-I SceI02.應(yīng)用前景 經(jīng)過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，本項(xiàng)目成果構(gòu)建的嵌合核酸酶可以在體外β-地中海貧血疾病患者造血干細(xì)胞中發(fā)揮作用，有望在臨床中得到應(yīng)用。03.知識(shí)產(chǎn)權(quán) 本項(xiàng)成果已申請(qǐng)1項(xiàng)發(fā)明專利，并已授權(quán)。04.團(tuán)隊(duì)介紹 本項(xiàng)目負(fù)責(zé)人為研究員、博士生導(dǎo)師，擔(dān)任中國(guó)自然科學(xué)基金委重大項(xiàng)目顧問(wèn)及基金評(píng)委、中國(guó)科技部973項(xiàng)目顧問(wèn)及基金評(píng)委，曾在多個(gè)國(guó)際權(quán)威期刊上發(fā)表SCI論文20余篇。05.合作方式 投融資。06.聯(lián)系方式 郵箱：zhangxinrui@tsinghua.edu.cn

臨床癥狀 流感病毒包括甲、乙、丙三型，甲型最容易引起流行。臨床表現(xiàn)為起病急、高熱、肌痛、頭痛伴有嚴(yán)重不適、干咳、咽喉痛或鼻炎，多數(shù)患者可在一到兩周內(nèi)恢復(fù)。對(duì)于兒童、老年人和有心肺疾病、糖尿病、癌癥等慢性病患者，會(huì)造成嚴(yán)重后果，甚至死亡。 臨床檢測(cè)意義 1、 用于甲型流感病毒感染的早期診斷，為感染者選擇最佳的治療方案提供診斷依據(jù)； 2、 為流感樣癥狀的患者提供實(shí)驗(yàn)診斷的依據(jù)，臨床指導(dǎo)用藥，避免濫用抗生素； 3、 減少患者的痛苦和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。及時(shí)檢測(cè)，能夠有效防止擴(kuò)散，減少疾病的傳播； 4、 流行病學(xué)調(diào)查； 5、 有助于疫情爆發(fā)流行的控制。 產(chǎn)品特點(diǎn) 1、產(chǎn)品配備即開(kāi)即用型核酸提取試劑。從核酸提取到獲得結(jié)果，全程耗時(shí)少于2小時(shí)。 2、擴(kuò)增曲線平臺(tái)明顯，斜率大 3、RT-PCR反應(yīng)在同一管內(nèi)連續(xù)進(jìn)行，并能有效防止污染 4、無(wú)需多通道PCR儀，適用于多種熒光PCR儀器。 5、通過(guò)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局生產(chǎn)質(zhì)量管理體系考核，通過(guò)德國(guó)TÜV SÜD ISO 13485國(guó)際認(rèn)證，確保生產(chǎn)、存儲(chǔ)等環(huán)節(jié)中產(chǎn)品質(zhì)量的嚴(yán)格控制。 6、RNase P作為本試劑盒的內(nèi)部參照，對(duì)反應(yīng)結(jié)果進(jìn)行控制，避免假陰性。

本發(fā)明公開(kāi)了一對(duì)轉(zhuǎn)錄激活子樣效應(yīng)因子核酸酶及其編碼基因與應(yīng)用。這對(duì)轉(zhuǎn)錄激活子樣效應(yīng)因子核酸酶(TALEN)由一對(duì)DNA識(shí)別蛋白分別與Fok1？DNA內(nèi)切酶的兩個(gè)異源亞基融合得到，可以特異性地識(shí)別山羊或綿羊朊蛋白基因(PRNP)exon2上的兩個(gè)相鄰位點(diǎn)。將這對(duì)轉(zhuǎn)錄激活子樣效應(yīng)因子核酸酶同時(shí)轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞時(shí)，其能對(duì)宿主細(xì)胞PRNP基因的exon2位點(diǎn)打靶，并使打靶位點(diǎn)發(fā)生基因突變，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)山羊或綿羊PRNP基因的靶向修飾，具有特異性強(qiáng)、打靶效率高、準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明涉及一組用于同時(shí)檢測(cè)腐爛病菌、黃化病植原體和叢簇病菌的三種病原的核酸、試劑盒和檢測(cè)方法，其中，用于多重PCR同時(shí)檢測(cè)三種病原的核酸包括腐爛病菌、黃化病植原體和叢簇病菌的上、下游引物；用于熒光定量PCR同時(shí)檢測(cè)三種病原的核酸還包括有各病原對(duì)應(yīng)的探針。本發(fā)明還建立了一種比較高效、靈敏的，可同時(shí)檢測(cè)腐爛病菌、黃化病植原體和叢簇病菌這三種病原的檢測(cè)方法。該方法能有效提高檢測(cè)的靈敏度，避免假陰性結(jié)果的