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基因治療可用于包括癌癥、艾滋病、心血管病、傳染性疾病等在內(nèi)的各種獲得性和遺傳性疾病。近幾年來核酸及基因藥物得到快速發(fā)展，已有多個(gè)核酸藥物經(jīng)FDA批準(zhǔn)應(yīng)用于臨床治療。基因治療相對(duì)其它治療方法有著若干優(yōu)勢(shì)，但在實(shí)際應(yīng)用過程中也面臨著一些挑戰(zhàn)。其中，基因輸送載體對(duì)于基因治療來說是十分關(guān)鍵。目前開發(fā)基因輸送載體的策略主要分為病毒和非病毒介導(dǎo)的輸送系統(tǒng)。病毒載體具有非常高的輸送效率并且可以保證基因的長(zhǎng)期表達(dá)，因此是目前臨床上應(yīng)用最多的載體。但病毒載體在臨床使用過程中也暴露出了許多缺陷，這些缺陷大大限制了病毒載體的應(yīng)用。為了克服病毒載體的諸多不足，近些年來非病毒載體得到了迅速發(fā)展。這其中就包括研究最廣泛的非病毒載體聚乙烯亞胺。PEI是最好的體外轉(zhuǎn)染試劑之一并且已經(jīng)被一些研究工作者當(dāng)成聚合物類基因轉(zhuǎn)染試劑的“金標(biāo)準(zhǔn)”。 PEI的轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞毒性主要受其分子量、支化程度、表面電勢(shì)和粒徑的影響。隨著分子量的升高，支鏈PEI轉(zhuǎn)染效率升高；然而，細(xì)胞毒性也同時(shí)升高。為了消除或降低與PEI有關(guān)的細(xì)胞毒性，目前已經(jīng)發(fā)展出了多種不同的策略。這些策略主要包括使用直鏈高分子量PEI，用多糖、親水性聚合物（如PEG）、二硫鍵連接臂、脂質(zhì)基團(tuán)等取代或連接高分子量和低分子量的支鏈PEI市場(chǎng)上銷售的PEI分子量范圍非常廣泛，從1000 Da以下到1.6 × 103 kDa都有。 維生素E是一種脂溶性化合物，它包括生育酚和生育三烯酚，其中α-生育酚是自然界中分布最廣泛、含量最豐富并且活性最高的維生素E形式。維生素E的生物功能除了最熟知的抗氧化功能之外，還涉及酶活性的調(diào)節(jié)、基因表達(dá)調(diào)控以及神經(jīng)生物學(xué)功能等。通過消化道吸收進(jìn)入血漿的維生素E經(jīng)受體介導(dǎo)進(jìn)入肝細(xì)胞，進(jìn)入肝細(xì)胞的維生素E又在維生素E結(jié)合蛋白的運(yùn)輸下進(jìn)入肝外組織。維生素E本身的疏水性質(zhì)、豐富的生物調(diào)節(jié)功能以及其受體介導(dǎo)的肝細(xì)胞攝取方式都預(yù)示著用它來修飾PEI有助于實(shí)現(xiàn)基因的器官靶向的遞送。 因此，我們開發(fā)了維生素E修飾的聚乙烯亞胺衍生物及其合成方法和應(yīng)用。維生素E的修飾有利于基因質(zhì)粒的包載、遞送和釋放，其毒性隨著PEI上的維生素E飾數(shù)目的增加而降低，維生素E的修飾能夠大大增加pDNA質(zhì)粒的細(xì)胞攝取后基因編碼蛋白的表達(dá)。動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明PEI衍生物可成功將pDNA質(zhì)粒輸送到小鼠的肝臟和肺臟中，該復(fù)合物（PEI/pDNA）能進(jìn)入肝臟和肺臟細(xì)胞并進(jìn)一步釋放質(zhì)粒DNA和基因表達(dá)。本成果具有聚乙烯亞胺衍生物作為基因輸送載體具有毒性低、轉(zhuǎn)染效率高和基因藥物已釋放等優(yōu)點(diǎn)。

本項(xiàng)目首次實(shí)現(xiàn)了將核酸提取、核酸擴(kuò)增以及核酸檢測(cè)集成到同一試紙上，并最終實(shí)現(xiàn)了核酸從提取到檢測(cè)的集成化和小型化，成本低廉、操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)周期短，開發(fā)裝置已經(jīng)完成實(shí)驗(yàn)室小試階段，產(chǎn)品原型已經(jīng)開發(fā)完成。填補(bǔ)紙的核酸檢測(cè)市場(chǎng)空白，用于真菌檢測(cè)的LAMP集成試紙的研發(fā)及產(chǎn)業(yè)化將具有非常巨大的市場(chǎng)前景。

目前適配體廣泛應(yīng)用的瓶頸為篩選技術(shù)效率低下，現(xiàn)有的篩選技術(shù)無法滿足科研以及產(chǎn)品對(duì)識(shí)別靶標(biāo)高親和、高特異性的需求。適配體篩選技術(shù)已成為適配體應(yīng)用發(fā)展的關(guān)鍵。

依托豐富的發(fā)酵、食品、醫(yī)藥、中草藥、經(jīng)濟(jì)作物或植物等過程物料分離提取純化的開 發(fā)、工程經(jīng)驗(yàn)，本平臺(tái)積累了豐富的上述領(lǐng)域生理活性物質(zhì)或天然產(chǎn)物分離提取技術(shù)、工藝 包、裝備選型、工程設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)和資料庫，可為合作伙伴提供成熟工藝技術(shù)或中試階段起步技術(shù) 開發(fā)，實(shí)現(xiàn)具有國內(nèi)領(lǐng)先水平的工藝技術(shù)應(yīng)用，產(chǎn)生顯著經(jīng)濟(jì)效益。

深圳國際研究生院張盛副教授團(tuán)隊(duì)在已開展的核酸測(cè)序方面的專用圖像傳感元器件關(guān)鍵技術(shù)基礎(chǔ)上，提出了“基于單分子熒光圖像測(cè)序的冠狀病毒核酸智能檢測(cè)技術(shù)”重大攻關(guān)項(xiàng)目研究方案。課題組通過遠(yuǎn)程網(wǎng)絡(luò)討論與協(xié)作等多種方式，組織了相關(guān)學(xué)科的專家多次進(jìn)行技術(shù)研討，并與深圳市行業(yè)內(nèi)的權(quán)威機(jī)構(gòu)合作，在兩周內(nèi)快速進(jìn)行原理論證，形成技術(shù)方案，完成智能檢測(cè)裝置的原型結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)及前期研究準(zhǔn)備工作。 項(xiàng)目致力于開發(fā)具有核酸智能檢測(cè)能力的低成本嵌入式物聯(lián)網(wǎng)設(shè)備，為公共衛(wèi)生防疫事業(yè)提供更加有力、且具備“提前生產(chǎn)、快速部署、分散檢測(cè)”特點(diǎn)的新型核酸檢測(cè)的解決方案，有望實(shí)現(xiàn)未來冠狀病毒傳染事件中基因序列的快速發(fā)布與潛在感染者的本地化核酸檢測(cè)能力快速部署，幫助醫(yī)護(hù)人員和民眾在家庭或社區(qū)對(duì)感染或疑似患者進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)篩查，減少潛在感染者的聚集與交叉感染，快速實(shí)現(xiàn)核酸檢測(cè)層次的確診檢驗(yàn)與病癥初篩，助力疫病防控和公共衛(wèi)生領(lǐng)域戰(zhàn)略科技力量的提高和儲(chǔ)備。

四川大學(xué)華西醫(yī)院實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)科應(yīng)斌武教授帶領(lǐng)的臨床團(tuán)隊(duì)，與柯博文教授、耿佳教授科研團(tuán)隊(duì)緊密合作，聯(lián)合攻關(guān)，成功自主研發(fā)了。RT-PCR試劑盒已經(jīng)完成臨床樣本檢測(cè)470例（陽性14例，陰性456例），IgG/IgM抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑盒已經(jīng)完成臨床樣本檢測(cè)40例（陽性15例，陰性25例），結(jié)果均達(dá)到國家衛(wèi)健委疾病預(yù)防控制局最新發(fā)布的《新型冠狀病毒感染的肺炎實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)指南》等相關(guān)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。RT-PCR檢測(cè)試劑盒以新型冠狀病毒ORFIab基因和N基因中的保守序列為靶位點(diǎn)設(shè)計(jì)特異性引物和寡核苷酸熒光探針，對(duì)病毒核酸進(jìn)行高特異性檢測(cè)，能夠排除其他冠狀病毒株的非特異性干擾，檢測(cè)靈敏度達(dá)到200 拷貝/毫升。該產(chǎn)品創(chuàng)新性構(gòu)建了防污染系統(tǒng)，有效降低了產(chǎn)物氣溶膠的污染。同時(shí)以假病毒為陽性對(duì)照，以人類看家基因?yàn)閮?nèi)標(biāo)，對(duì)檢測(cè)過程進(jìn)行全面監(jiān)控，進(jìn)一步提高了產(chǎn)品的抗干擾能力。

一、項(xiàng)目分類 關(guān)鍵核心技術(shù)突破 二、技術(shù)分析 （1）本技術(shù)能夠在僅使用一種標(biāo)記探針(即,檢測(cè)探針)的情況下，實(shí)現(xiàn)對(duì)多種靶核酸序列的同時(shí)檢測(cè)(多重檢測(cè))。 （2）本技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)多種靶核酸序列的同時(shí)檢測(cè)(多重檢測(cè)),并且能夠同時(shí)檢測(cè)靶核酸序列的最大數(shù)目遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出了所使用的標(biāo)記探針(即,檢測(cè)探針)的數(shù)目。 因此，本技術(shù)提供了一種簡(jiǎn)單、高效、低成本的多重檢測(cè)法。本技術(shù)能夠檢測(cè)的靶核酸序列的最大數(shù)目不受限于所使用的標(biāo)記探針(即,檢測(cè)探針)的數(shù)目；能夠基于相對(duì)有限數(shù)目的標(biāo)記探針(即,檢測(cè)探針)實(shí)現(xiàn)對(duì)顯著更多數(shù)量的靶核酸序列的同時(shí)檢測(cè)(多重檢測(cè))，這是特別有利的。 對(duì)比國內(nèi)外同類技術(shù)，本技術(shù)的優(yōu)勢(shì)包括：①標(biāo)記過程極為方便且成本低。假設(shè)同樣需要識(shí)別15種高危型HPV，已商品化的實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)試劑盒、已報(bào)道的多管實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)體系、包括實(shí)時(shí)PCR熔解曲線技術(shù)均需要15條熒光探針進(jìn)行檢測(cè)。而本技術(shù)只需要4條熒光探針就可以完成15種高危型HPV的識(shí)別。②熔點(diǎn)溫度不會(huì)受待檢DNA序列的多態(tài)性位點(diǎn)或二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響。傳統(tǒng)實(shí)時(shí)PCR技術(shù)和熔解曲線分析技術(shù)的檢測(cè)結(jié)果經(jīng)常會(huì)受到熒光探針覆蓋區(qū)的SNP或二級(jí)結(jié)構(gòu)的干擾。而本技術(shù)中熒光探針只與標(biāo)簽序列雜交，因此檢測(cè)獲得的熔點(diǎn)溫度可以保持恒定。③具備優(yōu)秀的兼容能力，一個(gè)熔點(diǎn)標(biāo)簽庫可以適用于不同領(lǐng)域多個(gè)對(duì)象的檢測(cè)，而且針對(duì)不同的檢測(cè)對(duì)象可以采用相同的檢測(cè)流程，試劑組份只需要更換雜交探針，設(shè)計(jì)上只需改動(dòng)雜交探針的特異雜交序列。這種體系兼容能力大幅度縮短了新體系的研發(fā)時(shí)間。④判讀統(tǒng)一規(guī)范，易于在臨床應(yīng)用中推廣。目前大部分檢測(cè)技術(shù)針對(duì)不同的檢測(cè)對(duì)象需要建立不同的判讀標(biāo)準(zhǔn)。而本技術(shù)則可以像條形碼一樣標(biāo)記不同的檢測(cè)對(duì)象，因此較容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化判讀。

植物提取物(Plant extracts)指采用適當(dāng)?shù)姆椒ǎ瑥闹参?植物全部或者某一部分)為原料提取或加工而成的物質(zhì)，按照提取植物的成份不同，形成甙、酸、多酚、多糖、萜類、黃酮、生物堿等;按照性狀不同，可分為植物油、浸膏、粉、晶狀體等?？捎糜卺t(yī)藥行業(yè)、食品行業(yè)、美容行業(yè)以及其它行業(yè)。