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本發(fā)明公開了一種產(chǎn)角蛋白酶的粘金黃桿菌及其分離方法。所述粘金黃桿菌拉丁名為Chryseobac？terium？L99，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCC？No.2295。本發(fā)明公開了該菌的形態(tài)學(xué)特征為：菌體桿狀，不產(chǎn)孢子，無運(yùn)動(dòng)性，革蘭氏染色呈陰性。本發(fā)明公開了該菌的全細(xì)胞脂肪酸主要成份為：十三甲基十四酸47.59％，二羥基-13-甲基十四酸和(或)Ω-7-順式-13甲基-十五酸15.72％，三羥基-15-甲基十六酸13.91％，Ω-9-順式-14甲基棕櫚酸9.48％。本發(fā)明還公開了該菌的16S核糖體DNA(16S？rDNA)全序列。本發(fā)明公開的分離方法包括三個(gè)步驟：普通營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基富集培養(yǎng)，以角蛋白為唯一碳氮源固體培養(yǎng)基初篩，以角蛋白為唯一碳氮源液體培養(yǎng)基的復(fù)篩。該方法快捷有效，所得菌種產(chǎn)酶能力強(qiáng)。

本發(fā)明涉及一種絲膠蛋白/羥基磷灰石復(fù)合膜的快速成型方法，目前還沒有一種制備條件溫和，生產(chǎn)過程綠色環(huán)保的絲膠蛋白/羥基磷灰石復(fù)合膜的成型方法。本發(fā)明將絲膠蛋白溶液干燥得絲膠蛋白膜；該膜浸入體積濃度35-45%乙醇溶液中，7-15min后取出得乙醇處理絲膠蛋白膜；將乙醇處理絲膠蛋白膜置于濃度為100mmol/L的CaCl2溶液中浸漬處理5-20s得浸漬處理絲膠蛋白膜，再置于濃度為60mmol/L的Na2HPO4溶液中浸漬處理5-20s得一次交互浸漬處理絲膠/羥基磷灰石復(fù)合膜，再重復(fù)用CaCl2溶液和Na2HPO4溶液浸漬處理得絲膠蛋白/羥基磷灰石復(fù)合膜。本發(fā)明制備條件溫和，生產(chǎn)周期短和綠色環(huán)保。

01.成果簡(jiǎn)介   “相”是指物質(zhì)系統(tǒng)中物理、化學(xué)性質(zhì)完全相同，與其他部分具有明顯分界面的均勻部分。“相變”是指物質(zhì)從一種相轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N相的過程。與固、液、氣三態(tài)對(duì)應(yīng)，物質(zhì)有固相、液相、氣相。有研究表明，相變機(jī)制也廣泛存在于生物細(xì)胞中，且在細(xì)胞生命周期的時(shí)空調(diào)控等方面發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。當(dāng)溶液中的多價(jià)大分子與其多價(jià)配體互作時(shí)，容易產(chǎn)生更大的復(fù)合物，后者的溶解度一般會(huì)降低，從而從普通溶液相分離出來，形成一個(gè)復(fù)合物富集的獨(dú)立的液態(tài)相，這個(gè)轉(zhuǎn)變過程被稱為“液-液分離相變”（即，“相變”）。 蛋白質(zhì)翻譯后修飾是指蛋白質(zhì)翻譯完成后，發(fā)生在蛋白質(zhì)的特定氨基酸殘基上的共價(jià)修飾過程，是蛋白質(zhì)生物合成的步驟之一。目前，已知存在300多種翻譯后修飾，常見的有甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化、糖基化修飾等，與蛋白質(zhì)翻譯后修飾相反的修飾過程為蛋白質(zhì)去修飾，如去甲基化、去乙酰化、去磷酸化、去泛素化、去糖基化等。 本項(xiàng)成果是一種檢測(cè)翻譯后/復(fù)制后/轉(zhuǎn)錄后修飾的蛋白質(zhì)/DNA/RNA與其修飾閱讀器間相互作用的成套試劑，由A、B、C和D四種試劑組成；（1）A由名稱為R的生物分子和名稱為X的蛋白質(zhì)連接而成；（2）B含有名稱為L(zhǎng)的生物分子；R與L相同或不同且二者間具有相互作用，R與L相互作用后發(fā)生相變；（3）C為由C單體形成的多聚體，C單體由名稱為mc的單體、名稱為甲的報(bào)告基團(tuán)和名稱為YC的生物分子連接得到的分子，大于等于兩個(gè)的mc能形成多聚體；（4）D由名稱為XL的帶有修飾的蛋白質(zhì)和名稱為YD的生物分子連接而成；YC與YD間具有相互作用。通過該成套試劑及基于該成套試劑創(chuàng)建的多價(jià)招募系統(tǒng)，利用相變機(jī)制實(shí)現(xiàn)了互作蛋白和配體在相變液滴中的高度富集，將原本較弱的互作信號(hào)強(qiáng)烈放大，使其易于檢測(cè)。02.應(yīng)用前景 本項(xiàng)成果可以為檢測(cè)經(jīng)翻譯后/復(fù)制后/轉(zhuǎn)錄后修飾的蛋白質(zhì)/DNA/RNA與其修飾閱讀器間的相互作用提供一種全新的技術(shù)手段。該技術(shù)尤其適合高通量篩選修飾酶或去修飾酶的抑制劑或促進(jìn)劑。03.知識(shí)產(chǎn)權(quán) 本項(xiàng)成果已申請(qǐng)1項(xiàng)發(fā)明專利。04. 團(tuán)隊(duì)介紹 本項(xiàng)成果負(fù)責(zé)人為清華大學(xué)研究員、博士生導(dǎo)師、清華大學(xué)結(jié)構(gòu)生物學(xué)高精尖創(chuàng)新中心成員、清華-北大生命科學(xué)聯(lián)合中心成員、中組部“青千”基金獲得者，主要從事“相變”相關(guān)領(lǐng)域的研究，并探索能夠廣泛應(yīng)用于鑒定生物大分子互作及互作調(diào)控物篩選的新技術(shù)。研究成果發(fā)表于多個(gè)國(guó)際頂級(jí)權(quán)威期刊，申請(qǐng)專利多項(xiàng)。05.合作方式 專利許可、合作開發(fā)。06.聯(lián)系方式 zhangxinrui@tsinghua.edu.cn

【發(fā) 明 人】樊文玲；肖偉；郭峰；潘林梅；朱運(yùn) 【摘要】 堿性中藥活性蛋白類成分吸附后膜的吸附和解吸裝置及吸附和解吸方法。該裝置由膜組件、循環(huán)泵、提取液或解吸液雙層儲(chǔ)料槽、滲透液儲(chǔ)料槽、壓力表、流量計(jì)、恒溫水浴、蠕動(dòng)泵、不銹鋼管道制成。該方法為：在0.25MPa下恒溫，膜超濾吸附含量為98%的堿性中藥活性蛋白類提取物溶液24h，計(jì)算活性成分吸附量，將吸附后的膜裝在解吸裝置上，將pH為5的鹽酸溶液作為解吸劑，恒溫，在壓力小于0.05MPa和膜面流速在0.1-1m/s條件下進(jìn)行解吸，得解吸率95%-99%。該方法和裝置適用于堿性中藥蛋白類成分的膜精制過程，尤其是注射劑除熱原和樹脂過程，可大大降低該類活性成分的損失率，提高其轉(zhuǎn)移率，同時(shí)膜獲得較好的再生。

血管活性腸肽(vasoactiveintestinalpeptide，VIP)是一種由 28 個(gè)氨基酸組成的多肽，主要是由外周神經(jīng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生，由副交感神經(jīng)節(jié)后纖維釋放，并且與乙酰膽堿共同存在，被認(rèn)為是胰高血糖素-胰泌素家族的一員。廣泛分布在中央神經(jīng)系統(tǒng)的類膽堿突觸前神經(jīng)細(xì)胞和外周肽能神經(jīng)細(xì)胞中，通過它可對(duì)多種器官進(jìn)行神經(jīng)支配，比如心臟，肺，消化系統(tǒng)和泌尿生殖道，眼睛，皮膚，卵巢和甲狀腺。VIP 在中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)中是一種重要的信號(hào)肽，通過其受體發(fā)揮生理作用，迄今為止，已有 3 種類型的 V

積極地從血液中去除β2-MG可以有效地預(yù)防和治療DRA。 一、項(xiàng)目分類 關(guān)鍵核心技術(shù)突破 二、成果簡(jiǎn)介 β2微球蛋白(β2-Microglobulin，β2-MG)是由淋巴細(xì)胞、血小板、多形核白細(xì)胞產(chǎn)生的一種小分子球蛋白，是主要組織相容性復(fù)合物(MHC-Ⅰ )的輕鏈部分，由99個(gè)氨基酸組成，分子量為11.8KD，半徑1 .6nm，可以從腎小球自由濾過，99.9％在近端腎小管吸收，并在腎小管上皮細(xì)胞中分解破壞。正常人血清中β2-MG的含量是0 .5～3mg/L。長(zhǎng)期接受透析治療的腎損傷患者體內(nèi)β2-MG容易產(chǎn)生積聚，從而引發(fā)透析相關(guān)性淀粉樣病變(DialysisRelated Amyloidosis，DRA)。病理?xiàng)l件下，腎損傷患者血液中的β2-MG的含量是正常水平的50-60倍，約為84mg ,主要癥狀表現(xiàn)為關(guān)節(jié)和關(guān)節(jié)周圍組織淀粉樣蛋白的沉積，從而導(dǎo)致骨骼和關(guān)節(jié)的病原性病變。透析多年的腎病患者，DRA臨床癥狀包括腕管綜合征(CTS)、骨關(guān)節(jié)病、破壞性關(guān)節(jié)病、囊性骨病和病理骨折。血液透析治療15年以上的患者，將出現(xiàn)系統(tǒng)性淀粉樣病變。因此，積極地從血液中去除β2-MG被認(rèn)為是有效地預(yù)防和治療DRA。

本發(fā)明公開了一種鈣依賴型蛋白激酶CPK32及其編碼基因和應(yīng)用。本發(fā)明的鈣依賴型蛋白激酶CPK32，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其編碼基因的CDS序列如SEQ ID NO.2所示。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)CPK32基因?qū)肽康闹参镏泻竽軌蛘{(diào)節(jié)目的植物的開花時(shí)間、調(diào)節(jié)抽薹時(shí)的葉片數(shù)目或調(diào)節(jié)目的植物中FLC的表達(dá)量。本發(fā)明的鈣依賴型蛋白激酶CPK32對(duì)于改良作物的開花時(shí)間具有重要調(diào)節(jié)作用，在作物的種質(zhì)資源改良中具有較大應(yīng)用價(jià)值。

將β-環(huán)糊精和偶氮苯基團(tuán)分別修飾于紫杉醇分子上，利用紫杉醇分子骨架與微管蛋白的特異性結(jié)合能力，以及在紫外和可見光照射下偶氮苯分子與β-環(huán)糊精空腔可逆鍵合的性質(zhì)，來調(diào)控微管蛋白的聚集狀態(tài)，進(jìn)而影響細(xì)胞活性。光譜實(shí)驗(yàn)表明，含有紫杉醇的偶氮苯分子在溶液中具有優(yōu)異的光致異構(gòu)性質(zhì)、掃描電鏡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，只有在反式偶氮苯修飾紫杉醇和β-環(huán)糊精修飾紫杉醇共同存在下，微管蛋白間才能發(fā)生明顯的聚合現(xiàn)象，同時(shí)微管蛋白的形貌由絲狀聚合物轉(zhuǎn)變成了粒徑較大的球狀納米粒子。通過對(duì)細(xì)胞染色進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，聚集后的微管廣泛分布在細(xì)胞中，能夠強(qiáng)烈改變細(xì)胞的形態(tài)并最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。該工作為調(diào)控生物大分子的聚集行為提供了一種新的策略。

1.簡(jiǎn)介 簡(jiǎn)單介紹項(xiàng)目/成果背景，解決的行業(yè)瓶頸問題或行業(yè)共性關(guān)鍵問題。 目前核桃加工主要是通過冷榨法制取核桃油，同時(shí)獲得富含蛋白的核桃粕。由于核桃壓榨時(shí)，一般都不脫除核桃衣，導(dǎo)致了核桃粕的食用性能差，一般只用做飼料。本項(xiàng)目將核桃進(jìn)行脫衣，再通過水提和分離，實(shí)現(xiàn)油脂體和蛋白的高效分離。在不使用有機(jī)溶劑和酶制劑的條件下，將油脂體加工成核桃油和蛋白-磷脂濃縮物，并同時(shí)制取高純度核桃蛋白。 2.創(chuàng)新要點(diǎn) 介紹本項(xiàng)目的主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)，總體水平（處于國(guó)內(nèi)/國(guó)際先進(jìn)/領(lǐng)先水平等）。 （1）除了制取核桃油，還可同步制取蛋白-磷脂濃縮物，可作為天然乳化劑； （2）除了制取上述兩種核桃油脂產(chǎn)品，還可同步制取貯藏性能佳的高純度核桃蛋白粉。 通過與現(xiàn)有核桃加工技術(shù)的對(duì)比，本項(xiàng)目處于國(guó)際領(lǐng)先水平。 3.關(guān)鍵指標(biāo) （1）每千克核桃仁，可制取580g左右的核桃油，30g左右的蛋白-磷脂濃縮物，100g左右的核桃蛋白粉（蛋白含量80%以上）； （2）蛋白-磷脂濃縮物成分含量：67%中性脂質(zhì)、10%具有極佳乳化性能的膜蛋白、9%核桃蛋白、7%磷脂、7%其它成分（包含鞘氨醇等）； （3）核桃蛋白粉中的精氨酸含量高達(dá)13%，是精氨酸的良好來源。

蛋白質(zhì)之間的相互作用對(duì)生命活動(dòng)至關(guān)重要。盡管已有不少體內(nèi)研究蛋白互作的方法，但由于許多蛋白互作是高度動(dòng)態(tài)的，因此用傳統(tǒng)的方法難以捕獲。本研究基于“招募”和“聚集”的原理，即將“誘餌”蛋白A錨定在線粒體的外膜上，如B蛋白能與A蛋白互作，則將被“捕獲”到線粒體外膜，發(fā)生富集；如C蛋白不與A蛋互作，則不會(huì)發(fā)生定位變化（圖1）。文章首先用線粒體錨定（Mito-docking）的方法有效驗(yàn)證了G蛋白亞基γ2和β1間的互作，并進(jìn)一步運(yùn)用該方法研究了核轉(zhuǎn)運(yùn)受體（importinαisoforms）與貨物蛋白（經(jīng)典的核定位信號(hào)cNLS）之間的互作，揭示了核轉(zhuǎn)運(yùn)受體-貨物蛋白的識(shí)別特異性