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本研究構建一種谷氨酸棒桿菌基因工程菌，使其同時發(fā)酵生產兩種產品：聚羥基脂肪酸酯和異亮氨酸；前者是胞內產品，后者是胞外產品。該基因工程菌可以降低生產成本，具有工業(yè)應用前景。研究結果顯示：將 phaCAB 基因簇導入 WM001后，WM001/pDXW-8-phaCAB 96h 產量為 9.58 g/L，而 WM001/pDXW-8 96h 產量為6.65 g/L，產率提高 65%達到 0.15g 異亮氨酸/g 葡萄糖。PHA 產量達到 28.7%(w/w)。關鍵技術 聚羥基脂肪酸酯（PHAs）是部分微生物生存在具有較高碳源與氮源的條件下，生成的一類微生物自身碳源、能源儲備物的胞內聚酯。根據相關報道，將 PHB 合成代謝基因簇導入細胞內，可實現(xiàn) PHB 與某些代謝產物的聯(lián)產和增產，提高底物的利用率。L-異亮氨酸是一種人體必需氨基酸，因其在醫(yī)藥、食品和健康保健領域有廣泛的應用，而使其近幾年的生產能力發(fā)展迅速，目前國際上比較先進的主流生產方式為發(fā)酵法生產 L-異亮氨酸。谷氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)是一種小棒狀、革蘭氏陽性的食品安全生產菌，目前已經用于工業(yè)生產 L-異亮氨酸，本成果構建能高產 PHAs 的 C. glutamicum 菌株，具有工業(yè)化應用潛力。 

研發(fā)階段/n成果簡介：聚-ε-L-賴氨酸（Poly-ε-L-Lysine，ε-PLL）是自然界中微生物發(fā)酵產生的陽離子型多聚氨基酸，由L型賴氨酸通過α-羧基和ε-氨基以肽鍵形式形成的高分子聚合物，是一種新型的生物合成的營養(yǎng)型天然食品防腐劑。美國、日本、韓國正式批準ε-PLL作為天然食品添加劑。與化學防腐劑相比，ε-PLL具有安全性、高效性、營養(yǎng)保健性、天然化、用量少等特點。與國外一些發(fā)達國家批準使用的代表性微生物食品防腐劑，如乳酸鏈球菌素(Nisin)和納他霉素(Natamycin)相比，ε-PLL

γ-聚谷氨酸（γ-PGA）是谷氨酸單體以γ-羧基與氨基相縮合的一種聚氨基酸，γ-PGA主鏈上有大量游離羧基存在，使聚谷氨酸具有水溶性聚羧酸的性質，如強吸水保濕性能，可用于化妝品、食品、分散劑、螯合劑、建筑涂料、防塵等領域，主鏈上的大量羧基易于修飾，為材料的功能化提供了條件，利于改性制備一系列功能材料。γ-PGA同時亦具有優(yōu)良的生物可降解性和生物相容性，對環(huán)境無污染，對人體無毒害，用作醫(yī)藥、生物醫(yī)用材料、化妝品、食品和環(huán)保等領域有明顯優(yōu)點。本實驗室篩選得到一株γ-PGA高產菌株（已獲專利授權：γ-聚谷氨酸及其鹽的制備方法，CN0112787.2），并對合成工藝條件進行了優(yōu)化；采用提純新工藝，降低了生產成本，提高了產品質量。同時，還開展了γ-PGA吸水材料的制備、綠色水處理劑、肥料增效等領域的應用研究。本項目已申請4項國家發(fā)明專利。

包裝與儲存本品用塑料桶包裝，每桶25Kg或250Kg，固體用牛皮紙袋或紙板桶包裝；也可根據用戶需要而定，貯存于通風的庫房內，貯存期十二個月安全防護本品應避免與眼睛、皮膚或衣服接觸，一旦濺到身上，應立即用大量清水沖洗。 項  目 PASP 液體 PASP 固體 外 觀 黃色至紅棕色液體 黃色至棕色粉末 固體含量/% ≥40.0 ≥96 pH值(1%水溶液) 9.0～11.0 <10.5 密度(20℃)/g·cm3 ≥1.20 N/A 堆積密度(Kg/Liter) N/A >0.5

聚天門冬氨酸（PASP）為氨基酸的聚合物，屬于生物高分子材料，是一種無毒、無污染、易降解的環(huán)境友好型化學品，用途極為廣泛。自1850年出現(xiàn)關于PASP合成的報導以來，逐漸受到世界上各大化學公司的關注。北京化工大學生物化工系自1998年開始研究聚天門冬氨酸的生產技術。首先利用富馬酸合成天門冬氨酸，然后采用新型天門冬氨酸聚合工藝，成功地制備了分子量從4000到18萬的聚天門冬氨酸，且分子量可控。富馬酸轉化率達95%，天門冬氨酸的收率達92%；聚天門冬氨酸鈉對天門冬氨酸的收率達80%以上。 PASP 除具有一般聚羧酸的特點外，還具有很好的生物相容性及生物降解性，這些特點使得PASP 具有十分廣泛的應用：①在水處理方面用作緩蝕劑、阻垢劑；②可作為肥料，吸收和富集植物根部周圍土壤中有用的元素；③PASP 具有良好的殺蟲、滅菌和分散能力，可用于農藥；④PASP 鹽對無機物、有機物都具有良好的分散作用，可在顏料、涂料、無機化工、及油田化學等領域獲得應用；⑤用于可降解高效吸水材料及日用化學；⑥用于醫(yī)藥等。 PASP 是一種性能優(yōu)越、無毒無污染、極易降解的水溶性高分子材料，其原料易得，價格不高。我國PASP 的研究和生產正處于起步階段，近年來脫色技術及淺色產品的開發(fā)成功拓寬了其廣泛的產品市場，因此開發(fā)PASP 產品前途遠大。 建立年產2000 噸的聚天門冬氨酸工業(yè)化裝置，總投資1500 萬元。其中，若以富馬酸為原料生產，固定資產需1200 萬元；若以天門冬氨酸為原料，固定資產需600 萬元。年產值5000 萬元，成本3500 萬元，利稅1500 萬元，具有非常好的經濟效益。

本項目獲國家科技進步二等獎、中國專利獎優(yōu)秀獎，江蘇省專利獎金獎等； 十一五國家科技支撐立項。 項目簡介 以玉米芯為原料，采用蒸汽爆破、酶解、集成膜分離（微濾除雜、納濾脫鹽、 超濾脫色、納濾濃縮）技術制備低聚木糖，得到低聚木糖含量（對總糖）為>70% 和>90%的兩種型號的糖漿和糖粉產品，其中木二糖~木四糖含量≥70%。生產成本 為 60000 元/噸，顯著低于國內外同類產品。項目技術具有節(jié)能、高效、環(huán)保的 優(yōu)點，生產線居國內外領先水平。已先后在新疆、山東等地實現(xiàn)產業(yè)化生產，最 大規(guī)模為年產 2000 噸低聚木糖

本項目技術通過生物煉制技術對大米草等多種海洋源生物質進行組分分離，獲取纖維素、半纖維素與木質素，并通過木聚糖酶將半纖維素轉化為低聚木糖。項目科學意義如下：（1）通過大米草中纖維素、半纖維素與木質素組分分離，闡明大米草等海洋源生物質纖維素、半纖維素與木質素組成與結構特點（2）通過木聚糖酶及半纖維素側鏈酶（如阿拉伯糖苷酶、阿魏酸酯酶、乙酰酯酶、葡萄糖醛酸酶等）對大米草半纖維素特異性酶解，解構海洋源生物質半纖維素素的分子結構特征。

γ-聚谷氨酸（Poly-γ-glutamic acid）是一種重要的天然聚合物，由 于其具有良好的性質已被廣泛應用于食品，化妝品，醫(yī)藥，材料等領 域。解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）LL3 是一株谷氨酸 非依賴型 γ-PGA 合成菌。為了提高其 γ-PGA 產量，項目組采用無痕 基因編輯技術對菌株進行了代謝工程改造。包括三部分：模塊化代謝 通路改造；蔗糖代謝途徑改造；谷氨酸合成途徑改造。 B. amyloliquefaciens LL3 是項目組從發(fā)酵食品中分離得到，它能 夠從蔗糖出發(fā)合成 γ-PGA。利用模塊化通路改造策略對 γ-PGA 合成 相關的八個代謝通路進行改造包括：γ-PGA 降解相關途徑；細胞呼吸 鏈；胞外蛋白及胞外蛋白酶合成途徑；細菌多糖合成途徑；次級小分 子代謝產物合成途徑；細胞自誘導因子合成途徑；谷氨酸合成途徑以 及 γ-PGA 合成途徑。最終整合獲得的最優(yōu)基因工程菌株 NK-anti-rocG （敲除了 epsA-O 操縱子（負責胞外多糖合成），sac 操縱子（負責果 聚糖合成），lps（脂多糖合成相關），pta（乙酸合成相關），pgdS（γ-PGA 降解酶），cwlO（細胞壁水解酶），luxS（AI-2 合成）以及表達 anti-rocG sRNA（抑制谷氨酸脫氫酶表達））γ-PGA 搖瓶發(fā)酵產量從 3.8 g/L 提高到 11.04 g/L，較對照菌株提高了 2.91 倍。γ-PGA 產物純度也 從 78.6%提高到 95.2%。5-L 罐補料分批發(fā)酵實驗得到 NK-anti-rocG 菌株產量可達 20.3 g/L。分子量 450,000 Dal，純度 95%以上。 項目特色： 1. 菌種（Bacillus amyloliquefaciens）LL3 是谷氨酸非依賴型 γ-聚谷 氨酸合成菌株；發(fā)酵生產主要原料為蔗糖； 2. 補料分批發(fā)酵產量為：20.3 g/L。 3. 授權專利號為：ZL200810053900.7 市場應用前景： γ-聚谷氨酸（Poly-γ-glutamic acid）是一種重要的天然聚合物，由 于其具有良好的性質已被廣泛應用于食品，化妝品，醫(yī)藥，材料等領 域。本項目采用谷氨酸非依賴型 γ-聚谷氨酸合成菌做為發(fā)酵菌種，以 蔗糖為原料發(fā)酵法生產 γ-聚谷氨酸，可產生巨大的經濟效益和社會效 益。

主要由 D-谷氨酸和 L-谷氨酸通過酰胺鍵聚合而成。作為一種高分子聚合物，γ-聚谷氨酸具有一些獨特的物理、化學和生物學特性如良好的水溶性，超強的吸附性，能徹底被生物降解，無毒無害，可食用等。在農業(yè)、食品、醫(yī)藥、化妝品，環(huán)保，合成纖維和涂膜等領域具有廣泛的應用前景，因此極具開發(fā)價值。 微生物絮凝劑是繼無機絮凝劑和有機絮凝劑之后出現(xiàn)的一種新型的、可自然降解的水處理劑，具有高效、無毒、無二次污染的特點。微生物絮凝劑是一類由微生物產生并分泌到細胞外具有絮凝活性的代謝產物，一般由多糖、蛋白質、DNA、纖維素、糖蛋白、聚氨基酸等高分子物質構成，分子中含有多種官能團，能使水中膠體懸浮物相互凝聚、沉淀。在傳統(tǒng)的絮凝劑中，無機絮凝劑投加量大，效果不佳，還會把大量金屬離子帶入最終產物中，對環(huán)境造成危害；有機合成高分子絮凝劑生物難降解，殘留單體有毒，會對環(huán)境造成二次污染。而微生物絮凝劑最突出的特點是具有生物降解性，而且高效、無毒、易降解、無二次污染且用途廣泛，是環(huán)境友好型絮凝劑，因而引起世界各國學者的廣泛關注和研究

中試階段/n成果簡介：目前，農業(yè)生產減肥增效、節(jié)能降耗、減少環(huán)境污染是人們關注的熱點。聚γ-谷氨酸（簡稱“γ-PGA”）作為一種綠色生物大分子材料，不僅可使作物增產10-30％，節(jié)肥10-20％，還可提高作物品質和作物抗病耐旱能力。華中農業(yè)大學農業(yè)微生物學國家重點實驗室率先在國際上開展了γ-PGA在農作物栽培中的應用，已申請γ-PGA發(fā)酵及γ-PGA在農業(yè)領域的應用等5項中國發(fā)明專利，其中獲得3項發(fā)明專利授權。三項相關課題鑒定成果分別于2007年，2008年，2009年通過湖北省科技廳組織的專家鑒定