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抗菌肽（antibacterial peptides or antimicrobial peptides）是生物體中存在的具有廣譜抗菌活性的內(nèi)源性肽類物質(zhì)，具有抗細(xì)菌、真菌和病毒的活性，也具有抗腫瘤的作用。分子量在2000～7000左右，由20～60個(gè)氨基酸殘基組成。這類活性多肽多數(shù)具有強(qiáng)堿性、熱穩(wěn)定性以及廣譜抗菌等特點(diǎn)，在食品和藥品方面有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。本項(xiàng)目采用有機(jī)溶劑提取、高速離心分離純化、真空低溫等高技術(shù)提取分離純化中國(guó)林蛙蛙皮中的活性生物肽生產(chǎn)天然生物抗菌劑。

項(xiàng)目成果/簡(jiǎn)介: 抗菌肽( Antibacterial peptides) 是由動(dòng)植物細(xì)胞內(nèi)特定基因編碼，經(jīng)外界條件誘導(dǎo)產(chǎn)生的一類對(duì)細(xì)菌、真菌及病毒等微生物具有殺傷作用的多肽。抗菌肽不同于抗生素的作用機(jī)制。抗菌肽對(duì)細(xì)菌、真菌、病毒和腫瘤等均有作用，尤其對(duì)耐藥性細(xì)菌有殺滅作用，具有廣譜性。 本項(xiàng)目主要涉及4種不同來源抗菌肽工程菌株以及生產(chǎn)工藝。具體為：美洲擬鰈抗菌肽Pleurocidin、果蠅抗菌肽Metchnikowin、假黑盤菌抗菌肽-菌絲霉素Plectasin以及梭魚娃2-RPLX等4種抗菌肽發(fā)酵生產(chǎn)工程菌株及菌株高效發(fā)酵生產(chǎn)工藝。 技術(shù)指標(biāo)（創(chuàng)新要點(diǎn)等）： 1. 抗菌肽工程菌株的構(gòu)建 2. 抗菌肽的分離純化以及活性鑒定； 3. 抗菌肽發(fā)酵生產(chǎn)工藝參數(shù)及流程。 抗菌肽的生物活性主要有抑制或殺滅細(xì)菌作用、抗真菌作用、抗病毒活性、抗寄生蟲作用、免疫調(diào)節(jié)作用以及抑制或殺傷腫瘤細(xì)胞作用。目前主要應(yīng)用領(lǐng)域包括但不限于作為抗生物替代品用于醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)、飼料工業(yè)、食品工業(yè)。知識(shí)產(chǎn)權(quán)類型:生物醫(yī)藥新品種技術(shù)先進(jìn)程度:達(dá)到國(guó)內(nèi)先進(jìn)水平成果獲得方式:獨(dú)立研究獲得政府支持情況:無

抗菌肽( Antibacterial peptides) 是由動(dòng)植物細(xì)胞內(nèi)特定基因編碼，經(jīng)外界條件誘導(dǎo)產(chǎn)生的一類對(duì)細(xì)菌、真菌及病毒等微生物具有殺傷作用的多肽。抗菌肽不同于抗生素的作用機(jī)制。抗菌肽對(duì)細(xì)菌、真菌、病毒和腫瘤等均有作用，尤其對(duì)耐藥性細(xì)菌有殺滅作用，具有廣譜性。 本項(xiàng)目主要涉及4種不同來源抗菌肽工程菌株以及生產(chǎn)工藝。具體為：美洲擬鰈抗菌肽Pleurocidin、果蠅抗菌肽Metchnikowin、假黑盤菌抗菌肽-菌絲霉素Plectasin以及梭魚娃2-RPLX等4種抗菌肽發(fā)酵生產(chǎn)工程菌株及菌株高效發(fā)酵生產(chǎn)工藝。 技術(shù)指標(biāo)（創(chuàng)新要點(diǎn)等）： 1. 抗菌肽工程菌株的構(gòu)建 2. 抗菌肽的分離純化以及活性鑒定； 3. 抗菌肽發(fā)酵生產(chǎn)工藝參數(shù)及流程。 抗菌肽的生物活性主要有抑制或殺滅細(xì)菌作用、抗真菌作用、抗病毒活性、抗寄生蟲作用、免疫調(diào)節(jié)作用以及抑制或殺傷腫瘤細(xì)胞作用。目前主要應(yīng)用領(lǐng)域包括但不限于作為抗生物替代品用于醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)、飼料工業(yè)、食品工業(yè)。

本發(fā)明涉及一種抗菌肽TO2?24及其應(yīng)用，具體涉及一種抗菌肽，其特征在于：所述抗菌肽的序列如SEQ ID No.1所示。該抗菌肽可有效殺傷海岸弧菌、藤黃微球菌和金黃色葡萄球菌三種魚類致病菌。本發(fā)明的抗菌肽經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證效果優(yōu)異。

本發(fā)明涉及一種融合型抗菌肽及其制備方法和應(yīng)用。通過枯草芽孢桿菌 WB600 所攜帶質(zhì)粒 pHYSGA 獲得分泌的融合型抗菌肽 GA，該融合型抗菌肽對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌均具有一定抑菌活性，作為添加劑加入飼料中，飼喂雞雛后表明該融合肽可以提高雞雛體重增長(zhǎng)率、提高雞雛的免疫指標(biāo)，可以成為禽畜、水產(chǎn)飼料中抗生素的優(yōu)秀替代品。

本發(fā)明提供了一種魚源抗菌肽hepcidin突變體及其應(yīng)用。本發(fā)明通對(duì)魚源抗菌肽hepcidin的氨基酸序列進(jìn)行空間結(jié)構(gòu)分析，將其25個(gè)氨基酸中的3處氨基酸進(jìn)行突變，獲得一種新型魚源抗菌肽hepcidin突變體，使其抗菌效力獲得顯著提高。在此基礎(chǔ)上，選用畢赤酵母偏愛密碼子，人工合成新型魚源抗菌肽hepcidin突變體基因，克隆于畢赤酵母中表達(dá)，獲得新型抗菌肽重組酵母菌株，并將發(fā)酵規(guī)模放大到發(fā)酵罐水平，實(shí)現(xiàn)抗菌肽產(chǎn)品的高密度發(fā)酵和高效表達(dá)。發(fā)酵液進(jìn)一步純化后可制成粉劑、液體等抗菌肽制劑，用于水產(chǎn)動(dòng)物飼料添加劑或水產(chǎn)動(dòng)物疾病的預(yù)防和治療制劑。

齲病是在以細(xì)菌為主的多種因素影響下，牙體硬組織發(fā)生的慢性進(jìn)行性破壞性感染性疾病。WHO 將列為僅次于心血管病、腫瘤之后的第三大非傳染性重點(diǎn)防治疾病。變形鏈球菌(Streptococcus mutans，SM)是齲病的主要致病菌，為革蘭氏陽(yáng)性菌，厭氧或兼性厭氧，抑制其生長(zhǎng)可有效治療齲 。變形鏈球菌以生物膜（SM biofilm）的形式存在并致齲。以生物膜形式存在的細(xì)菌與以浮游態(tài)存在的細(xì)菌相比，在代謝特點(diǎn)和生理現(xiàn)象方面存在著眾多明顯的不同點(diǎn)，如對(duì)抗菌劑的敏感性、基因表達(dá)和信號(hào)傳導(dǎo)、耐酸性等。細(xì)菌生物膜對(duì)

針對(duì)飼料、食品、化妝品和生物保鮮劑用防腐劑（抗菌肽）的特點(diǎn)和要求，用分子生物學(xué)手段開展動(dòng) 植物來源防御素和兩棲類動(dòng)物來源抗菌肽（LL-37和HsAFP1）的分子改良和產(chǎn)品研制，獲得對(duì)畜牧業(yè)和飼 料工業(yè)主要有害細(xì)菌、真菌和病毒均有高效殺滅作用的廣譜抗菌肽。應(yīng)用重組DNA技術(shù)構(gòu)建高效表達(dá)抗菌 肽的載體，篩選高效表達(dá)的可食用酵母工程菌，并完成產(chǎn)品的制粒、包被等后加工技術(shù)。

本發(fā)明公開了一種丁酸梭菌分泌的抗菌肽及其氨基酸序列和應(yīng)用。所述的抗菌肽氨基酸序列為序列表SEQ?ID?NO:1所示，分子量為2264.6道爾頓，等電點(diǎn)為8.64。其制備方法是：硫酸銨沉淀培養(yǎng)基中丁酸梭菌分泌的的抗菌肽，利用陽(yáng)離子交換、分子篩層析和反向高效液相色譜法純化抗菌肽。該抗菌肽具有顯著的抗菌活性，且不會(huì)對(duì)豬的紅細(xì)胞產(chǎn)生溶血作用，可用于開發(fā)制備飼用抗菌藥物。

成果描述：本課題采用理性設(shè)計(jì)的策略，通過基因重組的手段構(gòu)建雜合抗菌肽LfcinB-P-CB，具有活性高、穩(wěn)定性強(qiáng)、無毒等優(yōu)點(diǎn)。通過對(duì)抗菌肽工程菌發(fā)酵優(yōu)化，及抗菌肽純化、制劑工藝研究，建立中試規(guī)模的抗菌肽制劑的制備體系。抗菌效果達(dá)到雜合肽LPCB與Amp（50 μg/mL）抑菌直徑之比大于1.0；耐熱性強(qiáng)，在100 ℃條件下維持3 h活性無明顯降低；有一定的耐酸堿性，在pH 2~10的環(huán)境中仍能保持較高的活性；安全性高，對(duì)真核細(xì)胞幾乎無溶血性；實(shí)現(xiàn)雜合抗菌肽LfcinB-P-CB在畜禽生產(chǎn)中的應(yīng)用，解決抗生素等化學(xué)抗菌材料造成了日益嚴(yán)重的環(huán)境問題，降低某些物質(zhì)會(huì)以原型或代謝物形式排泄造成環(huán)境污染使環(huán)境中出現(xiàn)耐菌株的可能性，從而給人類生存環(huán)境構(gòu)成危害。市場(chǎng)前景分析：據(jù)國(guó)外報(bào)道，歐洲各國(guó)的養(yǎng)牛業(yè)、養(yǎng)豬業(yè)及養(yǎng)禽場(chǎng)無一例外普遍在配合飼料中添加了上述獸用抗生素作為“動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑”。泰洛星已成為當(dāng)今世界上頭號(hào)獸用抗菌劑，去年泰洛星的銷售額高達(dá)2.75億美元。我國(guó)當(dāng)前的動(dòng)物養(yǎng)殖面臨越來越嚴(yán)峻的疫病困擾，因此抗菌肽產(chǎn)品在動(dòng)物保健方面的開發(fā)和應(yīng)用在我國(guó)需求巨大。2010年全國(guó)動(dòng)物用抗菌肽類產(chǎn)品年銷售額接近一億元，但抗菌肽的總市場(chǎng)容量至少超過100億。因此本項(xiàng)目開發(fā)的抗菌肽具有廣闊的市場(chǎng)前景。與同類成果相比的優(yōu)勢(shì)分析：抗菌效果達(dá)到雜合肽LPCB與Amp（50 μg/mL）抑菌直徑之比大于1.0；耐熱性強(qiáng)，在100 ℃條件下維持3 h活性無明顯降低；有一定的耐酸堿性，在pH 2~10的環(huán)境中仍能保持較高的活性；安全性高，對(duì)真核細(xì)胞幾乎無溶血性；