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本發(fā)明公開了一種復(fù)合多糖凝膠及其電化學(xué) 3D 打印制備方法和應(yīng)用。將 pH 敏感性多糖與溫度敏 感性多糖分別配制成溶液，將兩種溶液混合均勻后室溫放置，形成復(fù)合多糖凝膠;將電化學(xué)陰極和陽極 一同插入復(fù)合多糖凝膠中，陰極固定在 3D 打印機(jī)的噴頭上;對 3D 打印機(jī)設(shè)置打印速度、模板規(guī)模、 填充密度以及沉積時(shí)間，通過外接電源控制輸出電信號，陰極在移動過程中沉積出復(fù)合多糖凝膠;將復(fù) 合多糖凝膠置于熱水中加熱，未沉積的復(fù)合多糖凝

研發(fā)階段/n一種豬藍(lán)耳病基因重組豬霍亂沙門氏菌疫苗及應(yīng)用。　　成果簡介：沙門氏菌是一種胞內(nèi)寄生的革蘭氏陰性腸道桿菌，具有侵襲性。減毒沙門氏菌為載體的基因工程疫苗具有無法比擬的優(yōu)越性，口服該種基因工程疫苗可以在激發(fā)產(chǎn)生抗沙門氏菌免疫應(yīng)答的同時(shí)誘發(fā)特異性針對外源蛋白的體液和細(xì)胞免疫。豬藍(lán)耳病是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種以妊娠母豬繁殖障礙以及仔豬呼吸道疾病的高度接觸傳染病，可對豬場造成巨大的損失。本發(fā)明涉及一種豬藍(lán)耳病基因重組豬霍亂沙門氏菌疫苗及應(yīng)用，屬于動物細(xì)菌基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具

01. 成果簡介 中東呼吸綜合征冠狀病毒（MERS-CoV）是2012年在中東地區(qū)首先發(fā)現(xiàn)的一種新型冠狀病毒，與嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒（SARS-CoV）同屬于β冠狀病毒，能夠引發(fā)嚴(yán)重的人類呼吸系統(tǒng)疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織的最新統(tǒng)計(jì)表明，MERS-CoV已造成全球27個(gè)國家2428例感染，致死率高達(dá)35%。 MERS-CoV表面刺突蛋白（Spike）蛋白是病毒顆粒與細(xì)胞受體二肽基肽酶4（DPP4）作用的關(guān)鍵蛋白，也是MERS-CoV疫苗與保護(hù)性單克隆抗體研究的熱門靶點(diǎn)。本項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)在靶向刺突蛋白的高活性中和抗體篩選、鑒定、分子結(jié)構(gòu)研究中取得了一系列突破。本團(tuán)隊(duì)在國際上首批報(bào)道了兩株人源MERS-CoV中和抗體MERS-4與MERS-27，它們均能高效抑制假病毒與活病毒對體外培養(yǎng)細(xì)胞的侵染，在動物模型中也顯示了很好的保護(hù)作用。該團(tuán)隊(duì)還綜合運(yùn)用結(jié)構(gòu)生物學(xué)、生物化學(xué)以及病毒學(xué)研究方法闡明了這兩株抗體識別Spike受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域（RBD）的不同位點(diǎn)，并阻斷Spike與受體DPP4的結(jié)合。 本項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)還利用一種稀有黑猩猩腺病毒AdC68為載體，搭載MERS-CoV表面全長的Spike蛋白，在轉(zhuǎn)基因小鼠（hDPP4-KI）模型中，一次滴鼻免疫即可誘導(dǎo)產(chǎn)生長期保護(hù)性免疫反應(yīng)，并完全預(yù)防小鼠感染或降低感染后的疾病進(jìn)展速度。解決了目前研發(fā)的MERS-CoV疫苗大多需要進(jìn)行多次免疫注射的復(fù)雜程序問題。進(jìn)一步的抗體分析表明，免疫動物血清中含有廣譜高滴度針對RBD的多克隆和單克隆中和抗體，能夠有效阻斷病毒與受體DPP4的結(jié)合，從而解析了其長期保護(hù)性免疫反應(yīng)的分子基礎(chǔ)和機(jī)制，為疫苗下一階段進(jìn)入大動物模型和人體臨床試驗(yàn)做好了準(zhǔn)備。                        MERS-CoV及其相關(guān)中和抗體和疫苗研究時(shí)間軸AdC68-S重組疫苗在hDPP4-KI轉(zhuǎn)基因小鼠模型上的保護(hù)效果02. 應(yīng)用前景 本項(xiàng)成果可應(yīng)用于治療或預(yù)防中東呼吸綜合征冠狀病毒的抗體藥物及疫苗候選物。03. 知識產(chǎn)權(quán) 本項(xiàng)成果已申請4項(xiàng)發(fā)明專利，其中3項(xiàng)已授權(quán)。04. 團(tuán)隊(duì)介紹 本項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)由生命學(xué)院實(shí)驗(yàn)室與醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室聯(lián)合組成，兩位實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人分別為清華大學(xué)生命學(xué)院和醫(yī)學(xué)院教授、博士生導(dǎo)師，主要研究方向分別為結(jié)構(gòu)生物學(xué)與病毒學(xué)，已發(fā)表國內(nèi)外高水平學(xué)術(shù)論文數(shù)十篇，聯(lián)合申請專利4項(xiàng)。05.合作方式 技術(shù)許可。06.聯(lián)系方式 郵箱：zhangxinrui@tsinghua.edu.cn

中試階段/n該技術(shù)可用于提高植物對病毒病、病原菌引起的病害的抗病性，Gep1多糖激發(fā)子分離純化自煙草疫霉，具有熱穩(wěn)定性，可耐受酸堿，在100℃高溫處理60min后和pH2-10條件下仍具有活性，將其噴施在植物葉面，可以誘導(dǎo)煙草產(chǎn)生抗性，對煙草花葉病毒病有較好的防效。每升發(fā)酵液可分離獲得6克多糖激發(fā)子，產(chǎn)量遠(yuǎn)高于蛋白類激發(fā)子。該激發(fā)子施用在田間后，對環(huán)境無污染，具有廣闊的應(yīng)用與市場前景。可用于多種植物抗病性的誘導(dǎo)劑。所需配套條件：適于真菌發(fā)酵的發(fā)酵罐，沉淀、離心濃縮設(shè)備和廠地，所需資金為100萬元，用

隨著世界養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，規(guī)模化飼養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用和飼養(yǎng)高度密 集，以及突發(fā)腹瀉因素存在，使得豬腹瀉病日趨流行，危害日漸嚴(yán)重。豬傳染 性胃腸炎與流行性腹瀉在養(yǎng)豬場引起豬腹瀉病的報(bào)道屢見不鮮，特別是規(guī)模化 豬場在受到藍(lán)耳病、圓環(huán)病等感染之后免疫功能下降時(shí)，豬腹瀉類病伺機(jī)暴發(fā)， 導(dǎo)致較嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本成果是利用自主分離鑒定豬傳染性胃腸炎與流行性 腹瀉病毒，通過基因工程的方法，在乳酸菌中進(jìn)行表達(dá)，通過優(yōu)化培養(yǎng)工藝， 提高乳酸菌的培養(yǎng)密度，混合研制的多價(jià)口服疫苗，用于該類疾病的免疫預(yù)防。 該產(chǎn)品的開發(fā)為該病的防控起到重要作用，具有重要的應(yīng)用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)效益。 

腹瀉是導(dǎo)致仔豬死亡的頭號疾病，每年給我國生豬生產(chǎn)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。目前，導(dǎo)致仔豬高發(fā)病率和高死亡率的主要致病原是變異株豬流行性腹瀉病毒（vPEDV）和新現(xiàn)豬丁型冠狀病毒（Porcine deltacoronavirus, PDCoV）。然而，目前國內(nèi)外尚無防控vPEDV和PDCoV感染致病的疫苗。 本科技成果是我校動科院預(yù)防獸醫(yī)學(xué)以唐玉新教授為首的科研團(tuán)隊(duì)聚焦于豬腸道腹瀉病原研究，成功分離出穩(wěn)定、高滴度的vPEDV和PDCoV為基礎(chǔ)成功研制而成。PDCoV是導(dǎo)致仔豬腹瀉的新現(xiàn)豬丁型冠狀病毒，該團(tuán)隊(duì)在我國大陸本土首先發(fā)現(xiàn)并進(jìn)行了系統(tǒng)研究，成果率先在國際SCI源刊物報(bào)道，該論文已成為ESI熱點(diǎn)論文（2015）和高被引論文（2016），實(shí)現(xiàn)了江西農(nóng)業(yè)大學(xué)高被引論文零的突破（引自：基于ESI的江西農(nóng)業(yè)大學(xué)優(yōu)勢學(xué)科評估分析報(bào)告（第1期），圖書館信息簡報(bào)，2017年6月）。vPEDV+PDCoV疫苗創(chuàng)制工作，獲得“十三五”國家重點(diǎn)研發(fā)專項(xiàng)資助（2017YFD0500600），目前已經(jīng)完成實(shí)驗(yàn)室階段等工作，即將進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段；成果目前已經(jīng)轉(zhuǎn)讓給國內(nèi)一家疫苗上市公司，轉(zhuǎn)讓金額1500萬元。本項(xiàng)目研究產(chǎn)品有望成為我國一類新獸藥，上市后，將產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益，據(jù)估算，每年可減少仔豬死亡約1000萬頭，創(chuàng)造直接經(jīng)濟(jì)效益>100億元，對提高生豬生產(chǎn)效益，降低動物病原對人類的威脅，保障人類健康和動物源食品安全，維持CPI穩(wěn)定均可起到十分的重要作用。

已有樣品/n豬流行性腹瀉病毒重組豬霍亂沙門氏菌基因工程活疫苗及制備與應(yīng)用。　　成果簡介：本發(fā)明的重組菌株表達(dá)的是豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒的保護(hù)性抗原基因。其中S蛋白的A、D抗原位點(diǎn)和N蛋白的N321抗原位點(diǎn)是豬傳染性胃腸炎病毒重要的免疫原性基因片段，COE基因和SD基因是豬流行性腹瀉病毒重要的免疫原性基因片段，均具有良好的免疫保護(hù)性。可以同時(shí)提供針對豬霍亂沙門氏菌、傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒三種病原的保護(hù)力。　　應(yīng)用前景：目前，PED商品化疫苗主要有滅活苗和弱毒苗兩種，這兩種疫苗

成果描述：目前已制定 《雞新城疫（La Sota）、傳染性支氣管炎（SAIBK）二聯(lián)滅活生產(chǎn)與檢驗(yàn)用種毒的研究資料》、《雞新城疫（La Sota）、傳染性支氣管炎（SAIBK）二聯(lián)滅活疫苗制造與檢驗(yàn)規(guī)程》、《雞新城疫（La Sota）、傳染性支氣管炎（SAIBK）二聯(lián)滅活疫苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》等相關(guān)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，研制出雞新城疫（La Sota）、傳染性支氣管炎（SAIBK）二聯(lián)滅活疫苗，已進(jìn)行申報(bào)臨床試驗(yàn)。市場前景分析：疫苗投入生產(chǎn)和使用后，預(yù)計(jì)在全國市場占有率達(dá)到20%以上。與同類成果相比的優(yōu)勢分析：該疫苗針對目前雞場流行腎型IBV毒株以及新城疫II型毒株，具有良好的免疫效果。疫苗投入生產(chǎn)和使用后，預(yù)計(jì)在全國市場占有率達(dá)到20%以上。

本產(chǎn)品含有雞新城疫病毒 La Sota 株和傳染性支氣管炎病毒 QXL87 株，每羽份病毒雞新城疫病毒含量不低于 106 EID50，雞傳染性支氣管炎病毒含量不低于 103.5 EID50；產(chǎn)品對雞新城疫免疫保護(hù)效率不低于 90%，對 QX 型傳染性支氣管炎病毒免疫保護(hù)效率不低于 80%。

本發(fā)明提供了一株樺褐孔菌QD04及其轉(zhuǎn)化虎杖生成白藜蘆醇、三萜皂苷和多糖的方法，所述樺褐孔菌QD04保存于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，編號為CCTCC?M?2015036，本發(fā)明利用藥用真菌QD04將植物中的白藜蘆醇苷轉(zhuǎn)化為白藜蘆醇，大大提高了其白藜蘆醇的收率，工藝簡單，重復(fù)性好；菌體能夠利用虎杖合成自身活性物質(zhì)三萜皂苷和多糖；發(fā)酵產(chǎn)物樺褐孔菌菌絲體含有豐富的人體必需氨基酸，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值；一次發(fā)酵過程同時(shí)獲得白藜蘆醇、三萜皂苷、多糖和樺褐孔菌菌絲體4種產(chǎn)品，生產(chǎn)過程附加值高；所述樺褐孔菌能夠更加徹底地水解虎杖纖維素，使虎杖生物質(zhì)資源得到充分利用，減少了資源浪費(fèi)和環(huán)境污染。