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本發(fā)明的目的是提供一種鴨坦布蘇病毒基因工程亞單位疫苗，即采用生物技術(shù)對(duì)鴨坦布蘇病毒E蛋白進(jìn)行抗原表位分析、拼接，獲得一種鴨坦布蘇病毒新型融合蛋白DE，并以該融合蛋白作為抗原來(lái)制備鴨坦布蘇病毒基因工程亞單位疫苗。本發(fā)明中鴨坦布蘇病毒新型融合蛋白DE，其編碼蛋白的氨基酸序列為SEQ ID NO:1；其中一種核苷酸序列為SEQ ID NO:2。本發(fā)明利用pET28a（+）表達(dá)性載體構(gòu)建了能表達(dá)鴨坦布蘇病毒新型融合蛋白DE的大腸桿菌BL21(DE3)宿主菌。將重組表達(dá)的蛋白純化后制備成基因工程亞單位疫苗，可使免疫后鴨群獲得免疫保護(hù)。

該專利首次利用畢赤酵母細(xì)胞展示技術(shù)，通過(guò)酵母細(xì)胞壁蛋白融合表達(dá)的方法，實(shí)現(xiàn)了脂肪酶分子的細(xì)胞自固定化，有效地解決了脂肪酶進(jìn)一步加工與應(yīng)用過(guò)程的穩(wěn)定性；利用酵母細(xì)胞展示的一步酶固定化技術(shù)，減少了傳統(tǒng)固定化酶方法的酶分離純化的步驟和損失，解決了酶在使用過(guò)程的回收及反復(fù)使用的問(wèn)題；將細(xì)胞展示脂肪酶的產(chǎn)酶水平進(jìn)一步提高達(dá)到國(guó)際先進(jìn)水平，為脂肪酶的在食品、飼料等領(lǐng)域的高效應(yīng)用提供了保證；參評(píng)專利在芳香酯生產(chǎn)、白酒釀造及脂酶復(fù)合飼料酶制劑生產(chǎn)等領(lǐng)域?qū)嵤?yīng)用，有效推動(dòng)了行業(yè)技術(shù)進(jìn)步和應(yīng)用企業(yè)產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外的競(jìng)爭(zhēng)力，近3年相關(guān)產(chǎn)品新增總銷售額7.29億元，實(shí)現(xiàn)利稅1.34億元。獲得了第十九屆中國(guó)專利獎(jiǎng)。

研發(fā)階段/n可用于豬生長(zhǎng)速度的遺傳改良，在豬的遺傳改良中生長(zhǎng)速度性狀一直是改良的重點(diǎn)，提高生長(zhǎng)速度可縮短生長(zhǎng)周期，節(jié)省飼養(yǎng)成本，但這個(gè)性狀的測(cè)定也必須等到豬長(zhǎng)到上市體重，因此測(cè)定工作需要花費(fèi)成本，用專利6，7和8可以進(jìn)行早期選擇，節(jié)約測(cè)定成本，縮短世代間隔，提高生長(zhǎng)速度。

已有樣品/n目前在臨床上，兩種PD-1單抗的使用劑量為2-3mg/kg，每2-3周靜脈輸入，歷時(shí)30-60分鐘。使用劑量大且頻繁。同時(shí)，單克隆抗體的制備、純化過(guò)程繁瑣，要求嚴(yán)格，導(dǎo)致單抗的價(jià)格昂貴，使受益于該單抗的病人在接受治療時(shí)受到極大限制。由于腺病毒制備、純化簡(jiǎn)單、產(chǎn)量高、安全性好、外源表達(dá)時(shí)間長(zhǎng)等特點(diǎn)，因此我們研發(fā)的腺病毒表達(dá)PD-1單抗制備簡(jiǎn)單、成本低、療效好、使用方便，可充分滿足臨床病人的需求。我們研發(fā)的重組腺病毒載體表達(dá)PD-1單抗為臨床相關(guān)腫瘤的治療與研究提供了一種有效的新手段，并具有

幾乎所有高等動(dòng)物都是二倍體，即生物擁有分別來(lái)自父本和母本的兩套基因組。人類的二倍體基因組一般以形態(tài)、結(jié)構(gòu)基本相同的同源染色體呈現(xiàn)。因?yàn)橥慈旧w序列高度相似，常見(jiàn)研究一般不區(qū)分同源染色體的父本和母本。這樣研究得到的結(jié)果是這兩套基因組的均值，忽略了同源染色體間的差異。同時(shí)，沒(méi)有同源染色體相互作用信息就無(wú)法構(gòu)建真正的三維基因組，無(wú)法研究其對(duì)基因表達(dá)的影響。該研究利用遠(yuǎn)親雜交產(chǎn)生后代攜帶大量雜合位點(diǎn)的優(yōu)勢(shì)來(lái)區(qū)分同源染色體的父本和母本。

本項(xiàng)目面對(duì)行業(yè)世界性技術(shù)難題，解決大腸桿菌包涵體產(chǎn)物妨礙重組蛋白質(zhì)藥物生產(chǎn)的問(wèn)題；建立我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的基因工程表達(dá)載體和體系。本項(xiàng)目通過(guò)深入了解蛋白質(zhì)折疊過(guò)程、建立了微生物可溶性表達(dá)及后加工技術(shù)體系，通過(guò)多環(huán)節(jié)調(diào)控蛋白質(zhì)折疊的策略，有效解決大腸桿菌包涵體難題，高效率低成本生產(chǎn)重組蛋白質(zhì)藥物。在生產(chǎn)環(huán)節(jié)發(fā)明了多種基因工程高效表達(dá)和不同層次助溶新技術(shù)及其整合；在制備環(huán)節(jié)發(fā)明了基因工程表達(dá)產(chǎn)物分離純化及后加工新技術(shù)及其集成。本項(xiàng)目獲8件發(fā)明專利授權(quán)、含1件美國(guó)專利，專利全部獲得實(shí)施許可。本項(xiàng)目技術(shù)在美

獨(dú)自擁有。

本發(fā)明提供了一種變異的 SCN11A 基因，即人類周圍神經(jīng)發(fā)作 性疼痛致病基因 SCN11A，其特征在于該變異的 SCN11A 基因的第 673 位堿基由野生型的 C 變異為 T；或該變異的 SCN11A 基因的第 2423 位堿基由野生型的 C 變異為 G。本發(fā)明還提供了一種檢測(cè)來(lái)源于人體 生物樣本中是否存在所述基因的突變方法及檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明提供 的變異的人類 SCN11A 基因可用于制備人類周圍神經(jīng)發(fā)作性疼痛基因 診斷芯片，變異的人類 SCN11A 基因所編碼的蛋白質(zhì)可作為治療人類 周圍神經(jīng)

2020年4月27日，我校華西醫(yī)院胸部腫瘤科盧鈾教授團(tuán)隊(duì)在Nature Medicine在線發(fā)表了題為“Safety and feasibility of CRISPR-edited T cells in patients with refractory non-small-cell lung cancer”的研究結(jié)果，報(bào)道了利用CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)在體外T細(xì)胞中編輯PD-1基因，經(jīng)體外T細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)增，再輸回非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）受試者，首次證明了該療法在NSCLC中的安全性和可行性。第一作者兼通訊作者為華西醫(yī)院胸部腫瘤科盧鈾教授，其他并列第一作者為胸部腫瘤科薛建新研究員、周曉娟主治醫(yī)師，四川大學(xué)華西醫(yī)院為第一作者單位。 2016年7月，《Nature》雜志率先報(bào)道盧鈾教授團(tuán)隊(duì)計(jì)劃開展首個(gè)CRISPR–Cas9基因編輯人體臨床試驗(yàn)，并于2016年10月進(jìn)行了首例受試者治療。項(xiàng)目組嚴(yán)格按照臨床研究方案計(jì)劃，隨訪2年，截止時(shí)間為2020年1月31日。該臨床試驗(yàn)完成12例三線及以上治療失敗的晚期肺癌患者的基因編輯細(xì)胞治療，入組受試者安全性和耐受性良好，無(wú)3級(jí)及以上細(xì)胞治療相關(guān)毒性發(fā)生和治療相關(guān)性死亡。在入組的12例受試者中，中位無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間（PFS）為7.7周，中位生存時(shí)間(OS) 為42.6周。臨床評(píng)價(jià)為疾病穩(wěn)定（SD）2例中，一例受試者穩(wěn)定時(shí)間近18個(gè)月。 該臨床試驗(yàn)還重點(diǎn)研究CRISPR基因編輯對(duì)T細(xì)胞制品的脫靶效應(yīng)，該團(tuán)隊(duì)分別利用二代測(cè)序技術(shù)（NGS）和全基因組測(cè)序技術(shù)（WGS）對(duì)細(xì)胞制品進(jìn)行脫靶檢測(cè)。結(jié)果顯示這種CRISPR基因編輯導(dǎo)致的脫靶效應(yīng)是低突變頻率或不常見(jiàn)的。該臨床研究是一項(xiàng)轉(zhuǎn)化性I期臨床試驗(yàn)，其成果的發(fā)表，為CRISPR基因編輯技術(shù)進(jìn)一步向臨床研究轉(zhuǎn)化提供了重要依據(jù)。