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01. 成果簡(jiǎn)介 中東呼吸綜合征冠狀病毒（MERS-CoV）是2012年在中東地區(qū)首先發(fā)現(xiàn)的一種新型冠狀病毒，與嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒（SARS-CoV）同屬于β冠狀病毒，能夠引發(fā)嚴(yán)重的人類呼吸系統(tǒng)疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織的最新統(tǒng)計(jì)表明，MERS-CoV已造成全球27個(gè)國(guó)家2428例感染，致死率高達(dá)35%。 MERS-CoV表面刺突蛋白（Spike）蛋白是病毒顆粒與細(xì)胞受體二肽基肽酶4（DPP4）作用的關(guān)鍵蛋白，也是MERS-CoV疫苗與保護(hù)性單克隆抗體研究的熱門靶點(diǎn)。本項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)在靶向刺突蛋白的高活性中和抗體篩選、鑒定、分子結(jié)構(gòu)研究中取得了一系列突破。本團(tuán)隊(duì)在國(guó)際上首批報(bào)道了兩株人源MERS-CoV中和抗體MERS-4與MERS-27，它們均能高效抑制假病毒與活病毒對(duì)體外培養(yǎng)細(xì)胞的侵染，在動(dòng)物模型中也顯示了很好的保護(hù)作用。該團(tuán)隊(duì)還綜合運(yùn)用結(jié)構(gòu)生物學(xué)、生物化學(xué)以及病毒學(xué)研究方法闡明了這兩株抗體識(shí)別Spike受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域（RBD）的不同位點(diǎn)，并阻斷Spike與受體DPP4的結(jié)合。 本項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)還利用一種稀有黑猩猩腺病毒AdC68為載體，搭載MERS-CoV表面全長(zhǎng)的Spike蛋白，在轉(zhuǎn)基因小鼠（hDPP4-KI）模型中，一次滴鼻免疫即可誘導(dǎo)產(chǎn)生長(zhǎng)期保護(hù)性免疫反應(yīng)，并完全預(yù)防小鼠感染或降低感染后的疾病進(jìn)展速度。解決了目前研發(fā)的MERS-CoV疫苗大多需要進(jìn)行多次免疫注射的復(fù)雜程序問題。進(jìn)一步的抗體分析表明，免疫動(dòng)物血清中含有廣譜高滴度針對(duì)RBD的多克隆和單克隆中和抗體，能夠有效阻斷病毒與受體DPP4的結(jié)合，從而解析了其長(zhǎng)期保護(hù)性免疫反應(yīng)的分子基礎(chǔ)和機(jī)制，為疫苗下一階段進(jìn)入大動(dòng)物模型和人體臨床試驗(yàn)做好了準(zhǔn)備。                        MERS-CoV及其相關(guān)中和抗體和疫苗研究時(shí)間軸AdC68-S重組疫苗在hDPP4-KI轉(zhuǎn)基因小鼠模型上的保護(hù)效果02. 應(yīng)用前景 本項(xiàng)成果可應(yīng)用于治療或預(yù)防中東呼吸綜合征冠狀病毒的抗體藥物及疫苗候選物。03. 知識(shí)產(chǎn)權(quán) 本項(xiàng)成果已申請(qǐng)4項(xiàng)發(fā)明專利，其中3項(xiàng)已授權(quán)。04. 團(tuán)隊(duì)介紹 本項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)由生命學(xué)院實(shí)驗(yàn)室與醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室聯(lián)合組成，兩位實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人分別為清華大學(xué)生命學(xué)院和醫(yī)學(xué)院教授、博士生導(dǎo)師，主要研究方向分別為結(jié)構(gòu)生物學(xué)與病毒學(xué)，已發(fā)表國(guó)內(nèi)外高水平學(xué)術(shù)論文數(shù)十篇，聯(lián)合申請(qǐng)專利4項(xiàng)。05.合作方式 技術(shù)許可。06.聯(lián)系方式 郵箱：zhangxinrui@tsinghua.edu.cn

隨著世界養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，規(guī)模化飼養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用和飼養(yǎng)高度密 集，以及突發(fā)腹瀉因素存在，使得豬腹瀉病日趨流行，危害日漸嚴(yán)重。豬傳染 性胃腸炎與流行性腹瀉在養(yǎng)豬場(chǎng)引起豬腹瀉病的報(bào)道屢見不鮮，特別是規(guī)模化 豬場(chǎng)在受到藍(lán)耳病、圓環(huán)病等感染之后免疫功能下降時(shí)，豬腹瀉類病伺機(jī)暴發(fā)， 導(dǎo)致較嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本成果是利用自主分離鑒定豬傳染性胃腸炎與流行性 腹瀉病毒，通過基因工程的方法，在乳酸菌中進(jìn)行表達(dá)，通過優(yōu)化培養(yǎng)工藝， 提高乳酸菌的培養(yǎng)密度，混合研制的多價(jià)口服疫苗，用于該類疾病的免疫預(yù)防。 該產(chǎn)品的開發(fā)為該病的防控起到重要作用，具有重要的應(yīng)用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)效益。 

腹瀉是導(dǎo)致仔豬死亡的頭號(hào)疾病，每年給我國(guó)生豬生產(chǎn)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。目前，導(dǎo)致仔豬高發(fā)病率和高死亡率的主要致病原是變異株豬流行性腹瀉病毒（vPEDV）和新現(xiàn)豬丁型冠狀病毒（Porcine deltacoronavirus, PDCoV）。然而，目前國(guó)內(nèi)外尚無防控vPEDV和PDCoV感染致病的疫苗。 本科技成果是我校動(dòng)科院預(yù)防獸醫(yī)學(xué)以唐玉新教授為首的科研團(tuán)隊(duì)聚焦于豬腸道腹瀉病原研究，成功分離出穩(wěn)定、高滴度的vPEDV和PDCoV為基礎(chǔ)成功研制而成。PDCoV是導(dǎo)致仔豬腹瀉的新現(xiàn)豬丁型冠狀病毒，該團(tuán)隊(duì)在我國(guó)大陸本土首先發(fā)現(xiàn)并進(jìn)行了系統(tǒng)研究，成果率先在國(guó)際SCI源刊物報(bào)道，該論文已成為ESI熱點(diǎn)論文（2015）和高被引論文（2016），實(shí)現(xiàn)了江西農(nóng)業(yè)大學(xué)高被引論文零的突破（引自：基于ESI的江西農(nóng)業(yè)大學(xué)優(yōu)勢(shì)學(xué)科評(píng)估分析報(bào)告（第1期），圖書館信息簡(jiǎn)報(bào)，2017年6月）。vPEDV+PDCoV疫苗創(chuàng)制工作，獲得“十三五”國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)專項(xiàng)資助（2017YFD0500600），目前已經(jīng)完成實(shí)驗(yàn)室階段等工作，即將進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段；成果目前已經(jīng)轉(zhuǎn)讓給國(guó)內(nèi)一家疫苗上市公司，轉(zhuǎn)讓金額1500萬元。本項(xiàng)目研究產(chǎn)品有望成為我國(guó)一類新獸藥，上市后，將產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益，據(jù)估算，每年可減少仔豬死亡約1000萬頭，創(chuàng)造直接經(jīng)濟(jì)效益>100億元，對(duì)提高生豬生產(chǎn)效益，降低動(dòng)物病原對(duì)人類的威脅，保障人類健康和動(dòng)物源食品安全，維持CPI穩(wěn)定均可起到十分的重要作用。

國(guó)際頂級(jí)綜合期刊美國(guó)科學(xué)院院刊（PNAS）在線發(fā)表動(dòng)物醫(yī)學(xué)院孔慶科博士課題組在多糖疫苗研究中的重要研究成果“Synthesis and delivery of Streptococcus pneumoniae capsular polysaccharides by recombinant attenuated Salmonella vaccines”（減毒沙門氏菌疫苗合成及遞送來源于肺炎鏈球菌的多糖抗原）。該研究首次通過合成生物學(xué)，細(xì)菌遺傳學(xué)及免疫學(xué)等方法，將革蘭氏陽性細(xì)菌的表面多糖抗原成功表達(dá)合成于革蘭氏陰性細(xì)菌減毒沙門氏菌的表面，并連接于沙門氏菌內(nèi)毒素的類脂A上，利用遺傳改造及調(diào)控的減毒沙門菌疫苗載體遞送肺炎鏈球菌的多糖抗原開發(fā)新型疫苗。該方法突破了目前固有的陽性細(xì)菌多糖疫苗的構(gòu)建方式，為將來快速、高效的構(gòu)建多糖疫苗奠定了基礎(chǔ)。 博士后蘇華荔及青年教師劉青博士為共同第一作者，動(dòng)物醫(yī)學(xué)院孔慶科博士為通訊作者，西南大學(xué)為第一完成單位及第一通訊作者單位。美國(guó)科學(xué)院院士、佛羅里達(dá)大學(xué)Curtiss教授為共同通訊作者，動(dòng)物醫(yī)學(xué)院2017級(jí)碩士研究生卞曉萍及佛羅里達(dá)大學(xué)王世峰博士參與相關(guān)工作。該研究得到國(guó)家自然科學(xué)基金及美國(guó)NIH項(xiàng)目的資助。

已有樣品/n豬流行性腹瀉病毒重組豬霍亂沙門氏菌基因工程活疫苗及制備與應(yīng)用。　　成果簡(jiǎn)介：本發(fā)明的重組菌株表達(dá)的是豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒的保護(hù)性抗原基因。其中S蛋白的A、D抗原位點(diǎn)和N蛋白的N321抗原位點(diǎn)是豬傳染性胃腸炎病毒重要的免疫原性基因片段，COE基因和SD基因是豬流行性腹瀉病毒重要的免疫原性基因片段，均具有良好的免疫保護(hù)性。可以同時(shí)提供針對(duì)豬霍亂沙門氏菌、傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒三種病原的保護(hù)力。　　應(yīng)用前景：目前，PED商品化疫苗主要有滅活苗和弱毒苗兩種，這兩種疫苗

成果描述：目前已制定 《雞新城疫（La Sota）、傳染性支氣管炎（SAIBK）二聯(lián)滅活生產(chǎn)與檢驗(yàn)用種毒的研究資料》、《雞新城疫（La Sota）、傳染性支氣管炎（SAIBK）二聯(lián)滅活疫苗制造與檢驗(yàn)規(guī)程》、《雞新城疫（La Sota）、傳染性支氣管炎（SAIBK）二聯(lián)滅活疫苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》等相關(guān)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，研制出雞新城疫（La Sota）、傳染性支氣管炎（SAIBK）二聯(lián)滅活疫苗，已進(jìn)行申報(bào)臨床試驗(yàn)。市場(chǎng)前景分析：疫苗投入生產(chǎn)和使用后，預(yù)計(jì)在全國(guó)市場(chǎng)占有率達(dá)到20%以上。與同類成果相比的優(yōu)勢(shì)分析：該疫苗針對(duì)目前雞場(chǎng)流行腎型IBV毒株以及新城疫II型毒株，具有良好的免疫效果。疫苗投入生產(chǎn)和使用后，預(yù)計(jì)在全國(guó)市場(chǎng)占有率達(dá)到20%以上。

本產(chǎn)品含有雞新城疫病毒 La Sota 株和傳染性支氣管炎病毒 QXL87 株，每羽份病毒雞新城疫病毒含量不低于 106 EID50，雞傳染性支氣管炎病毒含量不低于 103.5 EID50；產(chǎn)品對(duì)雞新城疫免疫保護(hù)效率不低于 90%，對(duì) QX 型傳染性支氣管炎病毒免疫保護(hù)效率不低于 80%。

本發(fā)明構(gòu)建一種新型混合佐劑DDA/PolyI:C。該混合佐劑組 （AMM+DDA/PolyI:C）和單獨(dú)佐劑組（AMM/DDA）分別加強(qiáng)免疫小鼠兩 次后，脾臟淋巴細(xì)胞經(jīng)抗原AMM刺激后，皆可產(chǎn)生分泌較僅有融合蛋 白AMM組高的IFN-γ; 肺部荷菌量試驗(yàn)表明佐劑實(shí)驗(yàn)組加強(qiáng)BCG免疫 后，肺部荷菌量都較PBS組低；肺組織病理分析顯示混合佐劑組 AMM+DDA/PolyI:C強(qiáng)化BCG免疫后，肺組織病理損傷較BCG組和DDA為佐 劑加強(qiáng)組輕（P＜0.05＝。

本發(fā)明構(gòu)建一種新型混合佐劑 DDA/PolyI:C。該混合佐劑組 (AMM+DDA/PolyI:C)和單獨(dú)佐劑組(AMM/DDA)分別加強(qiáng)免疫 小鼠兩次后，脾臟淋巴細(xì)胞經(jīng)抗原 AMM 刺激后，皆可產(chǎn)生分泌較僅 有融合蛋白 AMM 組高的 IFN-γ; 肺部荷菌量試驗(yàn)表明佐劑實(shí)驗(yàn)組加 強(qiáng) BCG 免疫后，肺部荷菌量都較 PBS 組低;肺組織病理分析顯示混 合佐劑組 AMM+DDA/P