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【發(fā) 明 人】劉睿；段金廒；錢大瑋；唐于平；郭建明 【摘要】 本發(fā)明涉及藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種具有抗氧化活性的六肽、其分離方法及用途。本發(fā)明的多肽具有下列序列結(jié)構(gòu)：Gln-Tyr-Asp-Gln-Gly-Val。這種多肽提取分離自水牛角，藥理試驗證明，本發(fā)明的多肽具有良好的抗氧化活性。

疼痛是人類所經(jīng)受的最常見的病癥之一，每個人的一生都會經(jīng)歷疼痛的困擾。據(jù)統(tǒng)計全球大約有 1/3 的人忍受著持續(xù)或周期性疼痛的折磨，美國在疼痛相關(guān)社會問題的花費約為 1 千億美元/年。在臨床上，嗎啡類的阿片藥物已被人們廣泛的應(yīng)用于治療和緩解各種疼痛，但由于阿片類的鎮(zhèn)痛藥物能引起嚴(yán)重的耐受、成癮、便秘和呼吸抑制等不良反應(yīng)，從而大大限制了其臨床應(yīng)用范圍。已有的研究結(jié)果表明，機體內(nèi)的阿片肽同樣也能通過激活阿片受體而介導(dǎo)鎮(zhèn)痛作用。為了獲得選擇性高、高效、分子較為穩(wěn)定的阿片類配體分子，在腦啡肽等阿片肽的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上

在臨床上，嗎啡類的阿片藥物已被人們廣泛的應(yīng)用于治療和緩解各種疼痛，但是由于阿片類的鎮(zhèn)痛藥能引起嚴(yán)重的不良反應(yīng)和阿片依賴作用，而大大限制其在臨床治療中的應(yīng)用。已有的研究表明哺乳動物中樞和外周都廣泛存在著阿片受體。1997 年，發(fā)現(xiàn)內(nèi)嗎啡肽（endomorphins，EMs），即內(nèi)嗎啡肽 1（EM-1，Tyr-Pro- Trp-Phe-NH2）和 2（EM-2，Tyr-Pro-Phe-Phe-NH2）為 μ 阿片受體（MOR）內(nèi)源性的高效選擇性的激動劑，它們對 μ 阿片受體的 Ki 分別為 360 pM

肽是介于氨基酸和蛋白質(zhì)之間的物質(zhì)。肽具有吸收快、無過敏、生理活性強 等優(yōu)點，是續(xù)蛋白質(zhì)，氨基酸后新一代的營養(yǎng)品。 小麥胚芽是小麥加工業(yè)過程中重要副產(chǎn)品。現(xiàn)代研究證明，小麥胚芽肽是目 前谷物類肽中抗氧化活性（能延緩衰老）和 ACE 抑制活性（抑制高血壓）最強的 蛋白肽，同時小麥胚芽肽在抗疲勞，防癌方面已經(jīng)被國外消費者廣泛認(rèn)可，產(chǎn)品市場前景廣闊。本項目經(jīng)過十多年研究，開發(fā)出國內(nèi)首套成熟的小麥胚芽活性肽生產(chǎn)技術(shù)，該技術(shù)具有設(shè)備投資小，產(chǎn)品品質(zhì)好等優(yōu)點，是小麥胚芽深加工首選。 

項目以大豆加工副產(chǎn)物—豆粕為原料，通過酶工程、膜分離、低溫萃取、活 性碳脫色、真空濃縮、閃蒸干燥等現(xiàn)代生物和食品技術(shù)的集成運用，開發(fā)得到功 能性大豆肽。功能性大豆肽產(chǎn)品具有優(yōu)良的色澤、風(fēng)味，蛋白質(zhì)含量≥85％，總 肽含量≥80%，溶解度≥90％，正電荷肽含量≥40％，平均相對分子質(zhì)量≤2000 道爾頓。大豆肽經(jīng)精制處理，其氮回收率不低于 80％，活性回收率不低于 85％。 

抗菌肽（antibacterial peptides or antimicrobial peptides）是生物體中存在的具有廣譜抗菌活性的內(nèi)源性肽類物質(zhì)，具有抗細(xì)菌、真菌和病毒的活性，也具有抗腫瘤的作用。分子量在2000～7000左右，由20～60個氨基酸殘基組成。這類活性多肽多數(shù)具有強堿性、熱穩(wěn)定性以及廣譜抗菌等特點，在食品和藥品方面有廣泛的應(yīng)用價值。本項目采用有機溶劑提取、高速離心分離純化、真空低溫等高技術(shù)提取分離純化中國林蛙蛙皮中的活性生物肽生產(chǎn)天然生物抗菌劑。

1998 年全球中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物的市場金額為 3.3×108 美元，還不到全球心血管疾病藥物市場份額的 1/2，但僅以美國為例，中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者卻是心血管疾病患者的大約兩倍（Drug Discov. Today, 2002, 7, 223）。引起這種不平衡狀態(tài)的一個重要原因在于 98%以上的具有潛在治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物無法穿透血腦屏障。 中樞神經(jīng)系統(tǒng)與外環(huán)境之間存在兩重屏障。包括位于腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞上的血-腦屏障（blood-brain barrier

涉及一種血管活性腸肽的融合蛋白，所述融合蛋白包含 1 個人血 清白蛋白(Albumin Human，HSA)和 1 個血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide，VIP),該融合蛋白所具有的獨特的氨基酸序列可以 保證其在宿主體內(nèi)高水平穩(wěn)定表達(dá)，在保留 VIP 原有功能的同時，體 內(nèi)半衰期顯著延長。本發(fā)明同時提供該融合蛋白的制備方法及其在制 備抗炎、抗損傷、腦血管疾病、提高睡眠質(zhì)量的藥物中的應(yīng)用。

所述融合蛋白包 含 1 個人血清白蛋白（Albumin Human，HSA)和 1 個血管活性腸肽 （vasoactive intestinal peptide，VIP）,該融合蛋白所具有的獨特的氨基酸序列可以保證其在宿主體內(nèi)高水平穩(wěn)定表達(dá)，在保留 VIP 原有功能的同時，體內(nèi)半衰期顯著延長。

糖尿病已成為威脅人類健康的重要慢性流行疾病。本課題組研發(fā) 的“降糖抗栓肽口服液”能顯著改善糖尿病模型小鼠的“三多一少” 癥狀、血糖濃度、胰島素抵抗和口服糖耐量，恢復(fù)臟器損傷，減少細(xì) 胞凋亡；改善血流變特性，防治血栓形成和發(fā)展；長期高劑量口服無 毒無害，是一種安全長效的口服降糖抗栓雙功能制劑。 本技術(shù)提供了完善的“降糖抗栓肽口服液”(有效成分為長效促胰 島素-水蛭素) 高效生產(chǎn)菌株、中試發(fā)酵和純化制備技術(shù)生產(chǎn)工藝。 項目特色： 首次采用無縫串聯(lián)融合技術(shù)克隆了長效促胰島素-水蛭素基因， 創(chuàng)制了其高效生產(chǎn)菌株、中試發(fā)酵工藝和純化制備技術(shù)。相關(guān)內(nèi)容已 獲 2 項國家發(fā)明專利、發(fā)表多篇 SCI 論文，并通過天津市科技支持重 點項目驗收鑒定(成果編號 14ZCZDSY00013/170800)。 完成了降糖抗栓肽的藥理、藥代和毒理學(xué)實驗研究，證明其能顯 著改善糖尿病模型鼠的“三多一少”癥狀、血糖濃度、胰島素抵抗和口 服糖耐量，恢復(fù)其臟器損傷，阻止細(xì)胞凋亡；改善血栓模型小鼠的血 液特性，延緩尾部血栓的形成和發(fā)展；口服降糖抗栓肽以快速吸收和 緩慢消除的形式發(fā)揮降糖和防栓功能；長期高劑量口服降糖抗栓肽未 發(fā)現(xiàn)明顯的急性、慢性、生殖和遺傳毒性，可以作為一種安全長效的 口服降糖防栓雙功能藥物。 “降糖抗栓肽口服液”具有顯著的“降糖抗栓”功效，其應(yīng)用將 使數(shù)以億計的糖尿病患者擺脫“久病纏身”和長期“打針注藥”的痛 苦，并可為企業(yè)帶來巨大商機、經(jīng)濟效益和社會效益。 市場應(yīng)用前景： 目前我國有糖尿病患者超1.2億，全世界糖尿病患者約4.5億人， 預(yù)計到 2040 年將超過 6.5 億，糖尿病已成為威脅人類健康的重要慢 性流行疾病，足見其需求迫切、應(yīng)用前景廣闊和市場潛力巨大。 “降糖抗栓肽口服液”具有顯著的“降糖抗栓”功效，其應(yīng)用 將使數(shù)以億計的糖尿病患者擺脫“久病纏身”和長期“打針注藥”的 痛苦。目前我國糖尿病患者比例已接近總?cè)丝诘?10%，且仍在逐年上 升，若“降糖抗栓肽口服液”能獲批上市，將給企業(yè)帶來數(shù)以億計的 經(jīng)濟效益和巨大的社會效益。